基于油酸誘導(dǎo)的高產(chǎn)三萜靈芝菌絲體發(fā)酵及生物合成途徑中關(guān)鍵酶編碼基因研究.pdf

1、靈芝是一種具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的大型藥用真菌。從靈芝中提取出的多糖、萜類、甾醇類以及生物堿類物質(zhì)被發(fā)現(xiàn)具有抗癌、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、抗菌、抗真菌、抗膽堿酯酶、抗炎、抗免疫調(diào)節(jié)活性等多種生物活性。本文主要研究三萜這一靈芝中的重要活性物質(zhì)。
　　油酸作為一種外源性物質(zhì)可以誘導(dǎo)靈芝高產(chǎn)三萜。本文對油酸促進(jìn)靈芝菌絲體高產(chǎn)靈芝三萜發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，促進(jìn)靈芝菌絲體高產(chǎn)靈芝三萜的最優(yōu)結(jié)果為:培養(yǎng)基成分為可溶性淀粉3.4％、魚蛋白

2、胨0.72％、KH2PO40.3％、MgSO40.15％、VB10.005％(m/v)，pH5.5，在發(fā)酵培養(yǎng)第0d加油酸4.38％(v/v);裝液量為100 mL，接種量為10％(v/v)，發(fā)酵周期為9d，胞內(nèi)三萜產(chǎn)量達(dá)到(287.67±3.77) mg/100 mL。
　　本文利用HPLC-ESI-MSn檢測靈芝三萜，初步鑒定出了11種不同的三萜化合物，包括:Ganoderic acid C2、Lucidenic acid N

3、、Ganoderenic acid B、7,15-dihydroxy-4,4,14-trimethyl-3,11-dioxochol-8-en-24-oic acid、Ganoderic acidA、Ganolucidic acid A、Lucidenic acid A、Ganoderic acid D、Lucidenic acid D、Ganolucidic acid D、Ganoderic acid J。并對其進(jìn)行了油酸誘導(dǎo)后產(chǎn)量變

4、化的實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)大部分種類的靈芝三萜可以被油酸誘導(dǎo)使產(chǎn)量提高。
　　本文通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)考察了油酸誘導(dǎo)對靈芝三萜生物合成途徑中關(guān)鍵酶基因轉(zhuǎn)錄水平的影響。結(jié)果表明，油酸可使SQS和CYP51這兩個(gè)靈芝三萜生物合成途徑中的關(guān)鍵酶基因上調(diào)表達(dá)，從而使靈芝菌絲體胞內(nèi)三萜產(chǎn)量大幅度提高。油酸對14α-LDM酶基因主要為抑制作用，從而抑制麥角甾醇這一代謝途徑，間接提高靈芝三萜產(chǎn)量。
　　本文通過發(fā)酵罐對靈芝進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，并將