環(huán)腺甘酸—蛋白激酶A在內(nèi)毒素休克肺損傷時誘導大鼠血紅素加氧酶-1上調(diào)中的作用.pdf

1、目的:嚴重的內(nèi)毒素血癥引起的器官衰竭是臨床成人及兒童病人死亡的主要原因之一。肺臟是內(nèi)毒素攻擊的主要器官，有證據(jù)表明40％的嚴重內(nèi)毒素血癥病人會引起肺損傷甚至急性呼吸窘迫綜合癥(ARDS)。內(nèi)毒素對肺通氣和循環(huán)功能引起顯著改變，包括肺部炎癥的擴散和肺血管內(nèi)皮組織的損傷等。血紅素氧合酶(HO)是血紅素降解過程中的一種限速酶，血紅素加氧酶-1(HO-1)為其誘導形式，廣泛存于機體組織和細胞內(nèi)，是生物體內(nèi)較易被誘導的抗氧化酶類，應激、創(chuàng)傷、低氧

2、等因素均可誘導其表達，發(fā)揮抗炎、抗氧化、抗細胞凋亡等細胞保護作用。盡管大量研究表明在急性肺損傷(ALI)等多種肺部疾病中，HO-1表達上調(diào)發(fā)揮著強大的防御作用和極具潛力的治療作用，但其內(nèi)源性保護機制至今尚未完全闡明。環(huán)腺苷酸依賴的蛋白激酶A(cAMP-PKA)簡稱PKA，是細胞內(nèi)一類重要的信息傳導途徑，并且在細胞增殖、分化、離子轉(zhuǎn)運、新陳代謝及基因表達調(diào)控中起著重要作用。PKA是HO-1信號傳導通路之一，研究表明在大鼠原代肝細胞、小鼠巨

3、噬細胞RAW264.7等多種器官細胞中PKA可誘導HO-1的表達。本文通過建立大鼠內(nèi)毒素休克肺損傷模型，從分子水平到基因水平擬探討環(huán)腺苷酸蛋白激酶A在大鼠內(nèi)毒素休克肺損傷時血紅素加氧酶-1表達上調(diào)中的作用，在內(nèi)毒素性肺損傷的內(nèi)源性保護機制方面提供新的思路和方法。
　　 方法:健康清潔級雄性SD大鼠48只，體重200～220g，2.5～3.0月齡，采用隨機數(shù)字表法隨機分為4組(n=12):①正常對照組（C組）:左股靜脈注射生理鹽水

4、（LPS溶媒）0.5ml，2h后皮下注射生理鹽水（H89溶媒）0.5ml;②內(nèi)毒素休克肺損傷組（ALI組），左股靜脈注射LPS(10mg/kg)0.5ml，2h后皮下注射生理鹽水0.5ml;③內(nèi)毒素休克肺損傷+抑制劑組（ALI+H組）:左股靜脈注射LPS(10mg/kg)0.5ml，2h后皮下注射H89(5mg/kg)0.5ml;④抑制劑組（H組）:左股靜脈注射生理鹽水0.5ml，2h后皮下注射H89（5mg/kg）0.5ml。C組、H

5、組首次注射至6h時，ALI組與ALI+H組首次注射LPS至6h時處死大鼠取肺組織，行病理學評分，測定肺組織含水率;應用Westernblot法測定肺組織HO-1和PKA表達;采用RT-PCR法測定肺組織HO-1mRNA表達。
　　 結(jié)果:與C組比較，ALI組和ALI+H組肺組織含水率升高，肺組織損傷病理學評分升高，PKA、HO-1蛋白和HO-1mRNA表達上調(diào)(P＜0.05)，H組上述各指標差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);與A