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1、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文細(xì)胞周期調(diào)控劑增強(qiáng)X-射線對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用及其機(jī)制研究姓名:孫新臣申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):微生物與生化藥學(xué)指導(dǎo)教師:邵榮光;甄永蘇2002.5.1論文摘要細(xì)胞的D o 為5 .6 3 G y ,對(duì)H T - 2 9 細(xì)胞的D o 為5 .9 6 G y 。根據(jù)文獻(xiàn)資料,我們?nèi)? G y 的劑量,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。檢測(cè)T e t 增強(qiáng)x 一射線對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷力,結(jié)果表明p 5 3 突變型M C F
2、 一7 /A D R 和H T - 2 9 細(xì)胞在照射后對(duì)T e t 更敏感。單用x 一射線處理M C F .7 /A D R 細(xì)胞,準(zhǔn)閾劑量( D q ) 值為2 .2 9 G y ;X .射線與T e t 合用,其D q 值為1 .5 2 G y ,增敏比( S E R D q ) 為1 .5 1 。對(duì)于H T - 2 9 細(xì)胞,單X 一射線處理D q 值為2 .9 9 G y :X 一射線與T e t 合用,其D q 值為1 .9
3、 8 G y ,增敏比( S E R D q )為16 3 。對(duì)于p 5 3 野生型M C F 一7 細(xì)胞X 一射線與T e t 合用,D q 值為1 .9 3 G y ,T e t 增效作用與p 5 3 基因功能有關(guān)。單用X 射線照射時(shí)D q 值為21 2 G y ,增敏比( S E R D 。) 為1 .1 0 。結(jié)果顯示流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T e t 對(duì)腫瘤細(xì)胞G 2 期的影響,結(jié)果顯示帶有野生型p 5 3基因的M C F .7 細(xì)胞,
4、經(jīng)過4 G y X .射線照射后,細(xì)胞阻滯于G l 期和G 2 期?而帶有突變型p 5 3 基因的M C F .7 /A D R 和H T - 2 9 細(xì)胞,在經(jīng)過4 G y X .射線照射后,細(xì)胞阻滯于G 2 期。照射后加入T e t ,引起M C F 一7 /A D R 和H T _ 2 9 細(xì)胞阻滯于G 2 期的百分比呈劑量依賴性的減少,而在M C F 一7 細(xì)胞這種變化不明顯。0 .】p MT e t ,在M C F 一7 /A
5、 D R 細(xì)胞,G 2 /M 期的比率由照射的5 6 %降低到3 5 .7 %;在H T - 2 9 細(xì)胞,G 2 /M 期的比率由照射的5 7 .3 %降低到3 3 .3 %:在M C F .7 細(xì)胞,G 2 /M 期的比率由照射的3 1 .1 %降低到2 0 .4 %。結(jié)果說明突變型p 5 3 細(xì)胞對(duì)T e t 誘導(dǎo)的G 2 期阻滯的清除作用比野生型p 5 3 細(xì)胞更敏感。W e s t e r nB l o t t i n g 檢
6、測(cè)X .射線和T e t 處理的細(xì)胞周期相關(guān)調(diào)控因子的變化。結(jié)果顯示,M C F .7 /A D R 細(xì)胞在受到4 G yX 一射線照射后,C y c l i nB 1 與C d c 2 蛋白的表達(dá)明顯降低,在加入T e t 后,C y c l i n B l 與C d c 2 蛋白的表達(dá)明顯增加,其中尤以T e t 濃度在1 9 M 時(shí)最明顯。在H T - 2 9 細(xì)胞中,我們也得到了類似的結(jié)果。經(jīng)照射和T e t 處理后,M C F
7、 .7 /A D R 細(xì)胞的對(duì)照組、單純4 G y X 一射線組、4 G y X .射線+ 0 .1 p M T e t 組的細(xì)胞分裂指數(shù)分別為4 .9 %、1 .3 %、1 4 .7 %;在M C F 一7 細(xì)胞,三組的分裂指數(shù)分別為5 .5 %、2 .4 %、7 .1 %;H T _ 2 9 細(xì)胞三組分裂指數(shù)分別為4 .5 %、】.5 %,1 3 .2 %。結(jié)果表明T e t 能夠明顯提高受照射細(xì)胞的分裂指數(shù),促使細(xì)胞進(jìn)入分裂期。我
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