長非編碼RNA-AK003290在成肌細胞增殖和分化過程中的功能研究.pdf

1、長非編碼RNA(Long noncoding RNAs，LncRNA)廣泛存在于哺乳動物體內，是一個轉錄本長度大于200個核苷酸，不編碼蛋白質的RNA。研究發(fā)現(xiàn)，長非編碼RNA對許多的生命活動具有十分重要的作用，lncRNA廣泛參與了機體免疫、肌肉分化以及生長發(fā)育的各個過程?；谇捌谘芯拷Y果，獲得了一個在肌組織中高表達的lncRNA-AK003290。本研究以小鼠C2C12細胞為研究模型，利用RNA干擾和超表達技術研究了lncRNA-A

2、K003290對成肌細胞增殖和分化的影響。具體的研究結果如下:
　　1、本研究首先利用RACE和Northern blot技術獲得了AK003290的全長，其次通過CPC軟件對該基因的編碼能力進行了預測，發(fā)現(xiàn)AK003290無蛋白編碼能力;且AK003290在肌肉組織中高表達，在成肌細胞分化的過程中AK003290的表達量持續(xù)上升，核質定位的結果表明在增殖期AK003290在細胞核表達，隨著成肌細胞的分化，AK003290不斷出細

3、胞核，在成肌細胞分化3天時核質均有分布。
　　2、通過干涉和超表達實驗對增殖的兩個標志基因ki67和N-Ras的mRNA和蛋白水平進行了檢測，發(fā)現(xiàn)這兩個基因的表達量沒有變化，同時運用RTCAxCELLigence系統(tǒng)和Edu染色對上述的結果做了進一步的驗證，結果顯示AK003290對成肌細胞增殖沒有顯著影響。
　　3、通過實時定量PCR、western blot和細胞免疫熒光技術研究干涉和超表達AK003290基因后對成肌細

4、胞分化的影響，干涉AK003290后，分化標志基因MyHC、MyoG、MyoD和Trdn的mRNA水平均顯著降低，MyHC和MyoG的蛋白水平表達量也明顯降低，免疫熒光檢測結果表明細胞融合率下降，阻滯成肌細胞向肌管分化;超表達結果同干涉結果相反，證實了AK003290正向調控成肌細胞的分化，另外，通過細胞劃痕實驗發(fā)現(xiàn)了AK003290能夠促進成肌細胞的遷移。
　　4、利用基因芯片篩選了被AK003290調控的下游靶基因，其中上調差