青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌(CNE-1)細胞輻射敏感性的影響及作用機制研究.pdf

1、目的：本課題分別研究青蒿素（artemisinin）與蒿甲醚（artemether）對p53突變型人鼻咽癌CNE-1細胞輻射增敏作用及機制；比較青蒿素與蒿甲醚對CNE-1細胞輻射增敏作用的差異性。通過檢測青蒿素與蒿甲醚的藥物濃度和作用時間對CNE-1細胞的抑制效應，確定用作輻射增敏實驗的藥物濃度及時間；通過研究青蒿素與蒿甲醚對輻射后CNE-1細胞增殖能力的影響，探討青蒿素與蒿甲醚對細胞輻射敏感性的影響；通過對青蒿素、蒿甲醚及60Coγ射

2、線作用后細胞周期以及細胞周期調控相關蛋白weel，cyclinB1表達水平的檢測，對青蒿素與蒿甲醚輻射增敏機制進行研究。并且，比較分析青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌細胞輻射增敏作用及作用機理。
　　 方法：（1）利用四氮唑鹽比色試驗（MTT）分別檢測青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌細胞存活分數(shù)的影響；（2）應用克隆形成法檢測青蒿素與蒿甲醚對細胞輻射敏感性的影響；（3）胞質分裂阻滯微核法（cytokinesis block method，CB法

3、）和常規(guī)染色體畸變分析分別研究青蒿素、蒿甲醚對60Coγ射線誘導CNE-1細胞微核率和染色體畸變的影響；（4）利用流式細胞術檢測60Coγ射線作用后青蒿素與蒿甲醚對細胞周期的影響；（5）應用Western Blot法觀察60Coγ射線作用后青蒿素、蒿甲醚對細胞周期調控相關蛋白weel，cyclinB1的影響。
　　 結果：（1）MTT實驗顯示青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌細胞的抑制率具有濃度及時間依賴性，其抑制作用隨青蒿素與蒿甲醚濃度

4、和作用時間的增加而增加；（2）青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌細胞的抑制率不同，當人鼻咽癌細胞的抑制率達到10％左右時，青蒿素與蒿甲醚的作用濃度分別為5μmol/L，和20μmol/L；（3）在濃度為5μmol/L青蒿素與20μmol/L蒿甲醚的作用下，細胞克隆形成率隨照射劑量增加而減少；青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌CNE-1細胞均具有輻射增敏作用，蒿甲醚較青蒿素對人鼻咽癌CNE-1細胞具有更強的輻射增敏作用；（4）對于CNE-1細胞，單純照射組和

5、青蒿素+照射組平均致死劑量（D0）分別為5.6Gy、4.4Gy，準閾劑量（Dq）分別為1.33 Gy、0.285 Gy，輻射增敏比（SER）為1.272；單純照射組和蒿甲醚+照射組平均致死劑量（D0）分別為5.6Gy、3.7Gy，準閾劑量（Dq）分別為1.33 Gy、0.25 Gy，輻射增敏比（SER）為1.481。蒿甲醚的輻射增敏比（SER=1.481）大于青蒿素的輻射增敏比（SER=1.272），同樣表明蒿甲醚對人鼻咽癌CNE-1細

6、胞的輻射增敏作用大于青蒿素；（5）微核和染色體分析顯示：青蒿素與蒿甲醚均能夠提高相同劑量照射誘發(fā)的CNE-1細胞的微核率和染色體畸變率；相同劑量照射，蒿甲醚作用后CNE-1細胞的微核率和染色體畸變率均高于青蒿素（P<0.01）：（6）流式細胞術檢測細胞周期發(fā)現(xiàn)，藥物+照射組與單純照射組相比，G0/G1期細胞比例上升（P<0.01），G2/M期細胞比例下降（P<0.01）；（7）Weaern-blot分析，藥物+照射組weel蛋白較單純照

7、射組減少，cyclinB1蛋白較單純照射組增加。
　　 結論：（1）青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌CNE-1細胞的抑制率隨著藥物濃度的增加及作用時間的延長而增加；（2）相同濃度的青蒿素對人鼻咽癌細胞的抑制率高于蒿甲醚的抑制率。（3）青蒿素與蒿甲醚對人鼻咽癌CNE-1細胞均具有輻射增敏作用。（4）蒿甲醚較青蒿素對人鼻咽癌CNE-1細胞具有更強的輻射增敏作用。（5）青蒿素與蒿甲醚對CNE-1細胞的輻射增敏作用與其抑制輻射誘導活化的G2/M