尼美舒利對(duì)喉鱗癌Hep-2細(xì)胞裸鼠成瘤的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的:盡管包括手術(shù)、放療、化療在內(nèi)的各種方法都在不斷改進(jìn),但喉鱗狀細(xì)胞癌(簡(jiǎn)稱喉鱗癌)患者的五年生存率仍較低,它嚴(yán)重威脅著人民的生命和健康；并且近年來(lái)喉鱗癌的發(fā)病率不但沒(méi)有降低,反而有上升且發(fā)病年輕化的趨勢(shì),因而尋找積極有效的預(yù)防途徑和治療藥物成為一項(xiàng)十分迫切的重要任務(wù)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究選擇性環(huán)氧化酶-2(cyclooxyge-nase-2,COX-2)抑制劑尼美舒利(nimesulide,NIM)對(duì)喉鱗癌Hep-2細(xì)胞裸裸鼠成瘤以及CO

2、X-2、生存素(Survivin)、增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cellnuclear antigen,PCNA)表達(dá)的影響,以探討NIM抗腫瘤的作用和可能的機(jī)制,從而為NIM用于喉鱗癌的預(yù)防和治療提供試驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:對(duì)喉鱗癌Hep-2細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng),制成細(xì)胞懸液,接種于Balb/c-nu/肌裸鼠右側(cè)背部皮下,建立移植瘤模型,12只荷瘤裸鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(即NIM治療組,腹腔注射NIM50mg/kg/2

3、d,0.2ml)和對(duì)照組(腹腔注射生理鹽水,0.2ml),觀察裸鼠生長(zhǎng)情況,定期(每?jī)商?稱量裸鼠體重并以游標(biāo)卡尺(每?jī)商?測(cè)量移植瘤的最長(zhǎng)徑及最短徑,繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線,計(jì)算腫瘤體積=腫瘤最長(zhǎng)徑×腫瘤最短徑2/2。用藥4周后,處死裸鼠,取瘤體,常規(guī)HE染色觀察移植瘤光鏡下改變,并取裸鼠主要內(nèi)臟行HE染色,觀察NIM對(duì)裸鼠可能的毒副作用。利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)COX-2、Survivin和PCNA蛋白表達(dá),顯微鏡下觀察移植瘤細(xì)胞中COX

4、-2、Survivin和PCNA蛋白表達(dá)情況,并采用圖像分析系統(tǒng)作平均光密度值測(cè)定。同時(shí)采用逆轉(zhuǎn)錄.聚合酶鏈反應(yīng)法(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測(cè) COX-2、Survivin和PCNA mRNA表達(dá),Biod-rad軟件分析對(duì)照組與試驗(yàn)組COX-2、Survivin和PCNA mRNA灰度值。
　　 結(jié)果:(1)成功構(gòu)建出人喉鱗癌裸鼠移植瘤模型

5、,兩組裸鼠均有喉鱗癌原位移植瘤生長(zhǎng),成瘤率100％；其瘤組織經(jīng)病理切片檢查證實(shí)為喉鱗癌,且在實(shí)驗(yàn)期內(nèi),2組動(dòng)物全部存活。(2)2組裸鼠飲食正常,活動(dòng)自如,精神狀態(tài)良好,無(wú)1只死亡；其心、肝、脾、肺、腎的重量和組織形態(tài)觀察無(wú)明顯差異,解剖消化道,未發(fā)現(xiàn)出血病灶。(3)NIM治療組裸鼠移植瘤體積為(172.67+115.25)mm3,較對(duì)照組(478.69±341.84)mm3明顯減小,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；NIM治療組裸

6、鼠體重為(23.22±1.78)g,對(duì)照組為(24.05±1.79)g,兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；NIM治療組裸鼠移植瘤重量(0.40±0.33)g,較對(duì)照組(0.83±0.27)g明顯減小,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),計(jì)算抑瘤率為51.81％。(4)免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)裸鼠移植瘤組織中COX-2、Survivin、PCNA蛋白表達(dá),MM治療組COX-2蛋白表達(dá)光密度為(38.12±15.56),與對(duì)照組(1

7、40.92±23.12)比較顯著下降,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；NIM治療組Survivin蛋白表達(dá)為(46.79±10.04),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析與對(duì)照組(133.41±20.01)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；NIM治療組PCNA蛋白表達(dá)顯著下降(62.97±13.83),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析與對(duì)照組(110.23±13.00)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(5)RT-PCR檢測(cè)COX-2 mRNA表達(dá)MM治療

8、組灰度值為(0.70±0.18),對(duì)照組為(2.23±0.38),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；NIM治療組Survivin mRNA表達(dá)為(0.34±0.04),對(duì)照組為(1.85±0.18),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；NIM治療組PCNA mRNA表達(dá)為(0.45±0.05),對(duì)照組為(1.91±0.70),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論:(1)選擇性COX-2

9、抑制劑NIM對(duì)喉鱗癌Hep-2細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)有明顯抑制作用。(2)NIM可抑制COX-2蛋白及mRNA表達(dá),推測(cè)NIM可通過(guò)依賴COX-2表達(dá)的方式抑制腫瘤生長(zhǎng)。(3)NIM可在蛋白及mRNA水平抑制喉鱗癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡,其機(jī)制可能與抑制COX-2、Survivin及PCNA表達(dá)有關(guān)。(4)NIM無(wú)明顯毒副作用。(5)選擇性COX-2抑制劑有望成為未來(lái)喉鱗癌綜合治療的一部分,它的研制開發(fā)可能為喉鱗癌預(yù)防和治療提供全新的廣闊前