葉酸偶聯2-ME白蛋白納米粒的制備及性質的初步研究.pdf

1、2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol，2-ME)是一種甾體激素類化合物，屬新型激素類抗腫瘤藥物，對快速生長的腫瘤細胞具有相對較高的特異性，且不會對骨髓和造血器官產生毒性。由于2-ME是一種難溶性藥物，胃腸道吸收差，血漿消除率快，生物利用度低等特點，限制了其在臨床上的開發(fā)應用。因此本文以牛血清白蛋白(BSA)作為藥物載體，小分子葉酸(FA)作為靶向因子，抗腫瘤藥物2-甲氧基雌二醇(2-ME)作為模型藥物，構建成以葉酸受體

2、介導的2-ME白蛋白納米粒腫瘤靶向給藥系統(tǒng)(2-ME-FA-BSANPs)，旨在提高2-ME的水溶性和生物利用度，減少給藥劑量，降低藥物毒副作用。
　　1.2-ME-FA-BSANPs的制備及相關性質的考察。
　　首先采用去溶劑化-化學交聯法制備2-ME白蛋白納米粒(2-ME-BSANPs)，通過單因素考察白蛋白濃度、2-ME濃度、交聯劑戊二醛用量、乙醇與水比例、溶液pH等條件，確定了2-ME-BSANPs制備工藝為:BSA

3、濃度為40mg/ml;2-ME濃度為4mg/ml;溶液pH值為10.0;乙醇與水的比例為3∶1。進一步利用葉酸活性酯與白蛋白納米粒表面活性氨基進行偶聯反應，制備葉酸偶聯的2-ME白蛋白納米粒靶向給藥系統(tǒng)(2-ME-FA-BSANPs)，使其具有主動靶向作用，并提高白蛋白納米粒的腫瘤細胞攝取率。
　　測定2-ME-FA-BSANPs平均粒徑和電位分別為(217.5±5.1)nm和(-37.59±1.39)mV;平均包封率與載藥量分別

4、為(82.50±5.80)％和(7.50±0.50)％;掃描電鏡圖顯示:2-ME-FA-BSANPs粒徑分布均勻，呈球形且表面光滑;體外釋藥結果顯示:原料藥2-ME釋放較快，在12h內累積釋放量達85％左右;相對應的2-ME-FA-BSANPs釋放緩慢平穩(wěn)，在96h內累積釋放量達85％左右，表明靶向給藥系統(tǒng)具有一定的緩釋特性;將靶向制劑制備成凍干粉，經篩選選擇3％的蔗糖作為其凍干保護劑;考察穩(wěn)定性結果顯示:在4℃和室溫條件下凍干粉可穩(wěn)定

5、保存6個月，表明該靶向制劑具有較好的穩(wěn)定性。
　　2.2-ME-FA-BSANPs體外抗腫瘤活性與靶向性的研究。
　　采用MTT法考察靶向給藥系統(tǒng)對SMMC-7721腫瘤細胞存活率的影響。在2-ME-FA-BSANPs作用時間24h、48h和72h，最大濃度為40μmol/l時，對應的腫瘤細胞抑制率分別為50.58％、68.53％和75.00％，相同條件下2-ME組的腫瘤細胞抑制率分別為25.28％、30.31％和35.37

6、％，結果表明在不同時間、不同濃度作用下，2-ME-FA-BSANPs組對腫瘤細胞的抑制率均高于2-ME組(P＜0.05)。
　　采用熒光顯微鏡法與細胞流式分析法考察2-ME-BSANPs和2-ME-FA-BSANPs的靶向性。結果顯示:相比于2-ME-BSANPs組，2-ME-FA-BSANPs組的熒光強度明顯增強，且在作用4h時2-ME-FA-BSANPs組進入細胞內的比例為99.8％，表明靶向給藥系統(tǒng)在葉酸介導作用下可以有效、

7、快速的進入腫瘤細胞內部，對腫瘤細胞具有較高的靶向作用;細胞周期研究結果表明所制備靶向給藥系統(tǒng)主要將SMMC-7721腫瘤細胞阻滯在G2/M期，且不改變原料藥2-ME的作用機制;細胞凋亡研究結果表明，與2-ME組相比，靶向給藥系統(tǒng)2-ME-FA-BASNPs能誘導更多腫瘤細胞發(fā)生凋亡。
　　3.2-ME-FA-BSANPs體內藥代動力學的研究。
　　本研究以Sprague-Dawle(SD)大鼠為動物模型，采用HPLC法測定2

8、-ME在大鼠血漿中的濃度，研究靶向給藥系統(tǒng)的體內藥代動力學特征。結果顯示，2-ME-FA-BSANPs和2-ME組的消除半衰期t1/2β分別為:(124.61±12.00)min和(22.17±6.00)min;兩組平均滯留時間MRT分別為(181.03±5.20)min和(22.66±2.54)min;兩組AUC分別為(290.53±10.10)(μg/ml)min和(112.99±5.50)(μg/ml)min。結果表明，2-ME-