多巴脫羧酶在胃癌腹腔沖洗液中的表達及其與胃癌腹膜轉移的關系.pdf

1、前言： 胃癌是源自胃粘膜上皮細胞的惡性腫瘤，主要治療手段是胃癌根治術，術后5年生存率為大概為32％～40％，其中約30％～50％的患者發(fā)生腹膜轉移，是導致患者死亡的重要原因[1]。胃癌腹膜轉移的過程為：癌細胞浸透胃漿膜，向腹腔脫落，在腹腔內環(huán)境作用下形成有生物活性的脫落癌細胞，進而與腹膜粘附著床，增殖形成癌結節(jié)。 胃癌細胞脫落入腹腔后，其在腹腔內的生物學活動導致許多特異性分子的產生。通過檢測這些特異性分子，不僅幫助我們分

2、析闡明胃癌腹膜轉移的分子生物學機制，還能作為腹膜轉移特異性標志物提示腹腔中脫落腫瘤細胞和微轉移灶的存在，進而幫助臨床采取有效的阻斷治療。目前這方面的研究對象主要集中在腫瘤細胞相關抗原、細胞外基質及相應的降解酶類、粘附分子與細胞因子等。 以往一些研究表明，多巴脫羧酶[39](dopa decarboxylase，DDC)是胃癌侵襲轉移過程中的重要因子。本研究用RT-PCR檢測92例胃癌腹腔沖洗液中DDC mRNA的表達，探討DDC

3、與胃癌腹膜轉移的關系，分析其在腹膜轉移過程中的作用，并為今后胃癌的基因治療以及預防轉移提供新的靶點。 材料與方法： 1、標本采集 選取中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院腫瘤外科2005～2006年間胃癌患者的腹腔沖洗液標本92例。腹腔液標本靜置5分鐘后，以2000r/min離心10min，取部分沉渣HE染色、細胞學檢查；其余沉渣深低溫冰箱凍存，用于提取總RNA。胃癌原發(fā)病灶的侵襲深度、漿膜類型、大體類型、生長方式等臨床病理

4、因素按13版日本胃癌病理規(guī)約標準判定。 2、 提取腹腔沖洗液總RNA TRIZOL法提取胃癌腹腔沖洗液沉渣標本中的總RNA。取少量RNA用于含量及純度測定，其余分裝后置-70℃保存。 3、RT-PCR擴增各個分子mRNA (1)cDNA第一鏈合成用反轉錄試劑盒將總RNA逆轉錄成cDNA第一鏈。 (2)PCR擴增各個指標cDNA引物序列利用Primer 3.0軟件設計，β-actin做內對照。

5、 (3) 瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產物，用安萊圖像分析儀掃描和Chemilmager5500軟件分析半定量。 4、統(tǒng)計學分析 實驗數據應用軟件SPSS 11.5分析，選用X2檢驗和方差分析對數據進行分析。 1、RT-PCR結果 92例胃癌腹腔沖洗液中，有57例檢測到DDC mRNA，陽性率為62.0％，表達相對值為0.758+0.094。而10例良性疾病腹腔沖洗液中均未檢測到DDC mRNA的表達。

6、 2、DDC mRNA的表達與胃癌腹膜轉移相關臨床病理因素比較 通過統(tǒng)計分析可見，胃癌腹腔液中DDC基因的表達相對值隨著腫瘤浸潤深度的加深而顯著增加，亦隨著漿膜類型的惡變而顯著增加(P<0.05)；另外，DDC的表達相對值還與PLC檢查結果及是否存在肉眼腹膜轉移灶有關(P<0.05)。 結論： DDC與胃癌腹膜轉移是密切相關的，通過RT-PCR方法檢測胃癌腹腔沖洗液中的DDC mRNA可以用于胃癌腹膜轉移