炎癥介導的CXCL16-CXCR6途徑激活在脂質肝損傷中的作用研究.pdf

1、目的：肝臟是脂代謝的核心器官，脂代謝紊亂在肝損傷中扮演重要作用。非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是一種常見的、病理上以肝細胞內脂質沉積及炎癥為主要特點的疾病，目前被認為是代謝綜合征在肝臟的主要表現。本研究旨在探討微炎癥狀態(tài)下細胞因子(C-X-C motif)配體16(CXC ligand16，CXCL16)及其受體CXC受體6(CXC chemokine recepto

2、r6，CXCR6)在NAFLD發(fā)生、發(fā)展中的作用及機制。
　　方法：研究分為體內、體外兩部分。將8周齡雄性載脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E knockout，ApoE KO)小鼠隨機分為對照組，高脂組，高脂+炎癥組。8周后處死小鼠，收集血漿標本及肝臟組織。體外研究，應用膽固醇(cholesterol，CHO)、白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)或CXCL16siRNA干預人肝細胞株(Hum

3、anhepatoblastoma cell line，HepG2)。采用化學酶法及ELISA法分別檢測脂質譜及炎癥因子水平，蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin-eosin staining，HE)、油紅O染色及Filipin染色觀察胞內脂質積聚情況。免疫組化、免疫熒光染色、Real-time PCR及Western Blot法檢測組織及細胞內炎癥因子、CXCL16/CXCR6信號通路相關蛋白以及胞外基質(extracellular

4、 matrix，ECM)的表達情況，并采用流式細胞儀法對活性氧簇(reactiveoxygen species，ROS)進行定量測定。
　　結果：與高脂組相比，高脂+炎癥組血清中炎癥因子血清淀粉樣蛋白A(serumamyloid proteinA，SAA)、肝細胞內腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF-α)及單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein1，MCP-1)表

5、達明顯增加，提示微炎癥動物模型構建成功，且高脂+炎癥組除HDL外，其他脂質成分顯著降低。進一步研究顯示，炎癥顯著增加肝細胞內脂質沉積及上調CXCL16/CXCR6信號通路相關蛋白的表達，并伴有胞外基質及氧化產物ROS的合成增加。有趣的是，體外應用CXCL16siRNA基因沉默HepG2細胞CXCL16的表達，則脂質沉積、胞外基質以及ROS的含量明顯減少。
　　結論：本研究證實，炎癥可能通過激活CXCL16/CXCR6信號途徑誘導胞