CCR5膜外一、二環(huán)模擬肽的淘選及其對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠的療效研究.pdf

1、目的：本文研究的目的旨在獲得與CC趨化因子受體5（CC chemokinereceptor5，CCR5）第一、二胞外環(huán)特異性結(jié)合的模擬肽，并將其應(yīng)用到實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（Experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）小鼠模型，觀察在應(yīng)用模擬肽后對EAE模型小鼠的治療效果。
　　 方法：首先，用噬菌體展示肽庫篩選與CCR5第一、二胞外環(huán)特異性結(jié)合的模擬肽。隨即挑取噬菌體克隆進(jìn)行E

2、LISA分析，將陽性克隆進(jìn)行DNA測序分析，接著合成外源模擬肽，腹腔注射到EAE鼠。取小鼠脊髓組織，H&E染色的方法來觀察EAE組和CCR5模擬肽組小鼠脊髓組織的組織病理學(xué)改變。
　　 結(jié)果：
　　 1.用Ph.D.-7TM（噬菌體展示肽庫試劑盒）親和篩選了與CCR5特異結(jié)合的噬菌體，經(jīng)過三輪篩選，噬菌體投入產(chǎn)出比逐漸升高，說明與CCR5親和的噬菌體富集明顯。
　　 2.采用ELISA方法測定從第三輪篩選出20個(gè)

3、噬菌體克隆，結(jié)果表明有18個(gè)克隆均為陽性克隆，說明篩選使與CCR5特異性結(jié)合的噬菌體得到了有效富集。
　　 3.分別測定上述實(shí)驗(yàn)所得到的10個(gè)與CCR5特異性結(jié)合的陽性噬菌體克隆的氨基酸序列，結(jié)果顯示：其中第一膜外襻中SLPLPKP、STFTTTL、QTSSAAL多肽序列分別占了6、6、5個(gè)，第二膜外襻中全部都是TPITQLL多肽序列。
　　 4.成功建立了EAE動(dòng)物模型，并將上述四段小分子肽分別應(yīng)用于EAE模型小鼠，結(jié)

4、果顯示：EAE組小鼠自免疫13天后開始發(fā)病，在第25天達(dá)到發(fā)病高峰，發(fā)病率為80％，臨床評分的平均分為3分。而模擬肽組小鼠發(fā)病時(shí)間明顯延遲，在第40天才達(dá)到發(fā)病高峰。
　　 5.脊髓組織病理切片經(jīng)HE染色，顯示EAE組小鼠脊髓的實(shí)質(zhì)中有大量的炎癥細(xì)胞浸潤，以神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞為主，在白質(zhì)區(qū)可見大小不等的髓鞘脫失區(qū)，而且髓鞘脫失區(qū)程度與EAE小鼠的臨床癥狀的嚴(yán)重程度直接相關(guān)。而給予CCR5模擬肽組小鼠脊髓的實(shí)質(zhì)中僅有少量的

5、炎癥細(xì)胞浸潤，且沒有髓鞘脫失。
　　 結(jié)論：用CCR5模擬肽治療EAE鼠后，和對照組相比有效的改善了疾病的發(fā)病進(jìn)程并且對EAE提供了有意義的保護(hù)作用。更進(jìn)一步的組織病理學(xué)分析顯示在CCR-5模擬肽治療組小鼠脊髓組織的單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤明顯減少。而在未經(jīng)CCR5模擬肽治療組的EAE鼠脊髓組織中有大量的炎癥細(xì)胞浸潤，并且在白質(zhì)脫髓鞘明顯。本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，4段短肽分別具有抑制、延遲發(fā)生EAE的作用。其平均抑制率為43％，效果顯