腸源性膿毒癥腹腔滲液致急性肺損傷的機理研究.pdf

1、目的：通過觀察腸源性膿毒癥腹腔滲液門、腔靜脈注射所致肺損傷情況，探索腸源性膿毒癥腹腔滲液導(dǎo)致急性肺損傷的機理。
　　方法：采用清潔級健康成年SD大鼠108只，隨機提取12只作為模型組（腹腔滲液組），采用盲腸結(jié)扎并穿孔法(CLP)，制備腸源性膿毒癥腹腔滲液（EFIS）模型，采集腹腔滲液，以精密過濾輸液器（過濾介質(zhì)孔徑5μm）過濾去除直徑大于5μm的顆粒狀物，濾出液備用；其余96只大鼠隨機分為滲液組（E組，n=48）和對照組（S組，n

2、=48）；每組再隨機分為門靜脈亞組（PV組、n=24）、腔靜脈亞組（VC組、n=24），各亞組按1h，2h，4h，6h時間點再分為4個次亞組，每個次亞組6只大鼠，共16個次亞組。E組分別經(jīng)門、腔靜脈注射處理后的腹腔滲液（1ml/只），S組注射等量的無菌生理鹽水；各組大鼠分別于注射后第1h，2h，4h，6h時間點經(jīng)腹主動脈采血、處死后取材肺標本、收集肺泡灌洗液（BALF）；觀察肺的形態(tài)學(xué)改變；測定肺濕/干比值(W/D)；肺組織經(jīng)固定、切片

3、、染色處理后，光鏡下閱片、病理學(xué)評分；酶聯(lián)免疫吸附試驗法（ELISA）測定腹腔滲液、血清及BALF中TNF-α及IL-6含量。MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)測定腹腔滲液、血清及BALF中LPS含量；所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0 for Windows統(tǒng)計軟件進行處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01為具有顯著差異。
　　結(jié)果：
　　1)每只大鼠可采集5-10ml腹腔滲液，其性狀為淡黃色或淡粉色略混濁樣液體。細菌

4、涂片鏡檢見革蘭氏陰性桿菌，細菌培養(yǎng)分離出8株細菌，其中大腸桿菌菌落數(shù)最多；腹腔滲液中亦檢測出一定水平的LPS、TNF-α及IL-6。
　　2)兩組對照組（PV-S、VC-S組）各觀察時間點的肺形態(tài)學(xué)及光鏡所見、病理學(xué)評分、肺濕/干重比值(W/D)、血清及BALF中LPS、TNF-α及IL-6水平均無明顯差異，均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。滲液組（PV-E、VC-E組）與對照組（PV-S、VC-S組）相比較：各觀察時間點肺形態(tài)學(xué)及

5、光鏡所見差異顯著，肺組織病理學(xué)評分、肺濕/干重比值(W/D)、血清及BALF中LPS、TNF-α及IL-6測定值均較對照組（PV-S、VC-S組）明顯增高，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（aP＜0.01，bP＜0.01）。3)肺臟大體形態(tài)學(xué)及光鏡所見：門靜脈組（PV-E）各時間點肺臟大體觀：肺的水腫、出血程度均較腔靜脈組（VC-E）明顯；鏡下所見：肺泡壁、肺間質(zhì)水腫程度，肺泡腔中性粒細胞及單核細胞浸潤程度，肺泡間質(zhì)、肺泡腔充血出血程度均較腔靜脈

6、組（VC-E）明顯；
　　4)病理學(xué)評分：PV-E組各時間點肺組織病理學(xué)評分均較VC-E組高，PV-E組1h即出現(xiàn)明顯肺損傷，出現(xiàn)時間較VC-E組早，且隨時間呈遞進式加重，PV-E組與VC-E組病理學(xué)評分相比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（aP＜0.05）。
　　5)肺濕/干重比值(W/D)測定：PV-E組與VC-E組各觀察時間點的肺濕/干重比值(W/D)相比較，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（aP＜0.05）；
　　6)血清及BALF

7、中LPS水平：PV-E組與VC-E組各時間點LPS水平均呈逐漸下降趨勢，但PV-E組下降更明顯；與VC-E組相比較，1h、2h、4h時間點LPS水平差異明顯，均具有統(tǒng)計學(xué)意義（bP＜0.05），兩組間6h時間點LPS水平無明顯差異（P＞0.05）。
　　7)血清及BALF中TNF-α及IL-6水平：PV-E組與VC-E組血清及BALF中TNF-α及IL-6水平的測定水平在各觀察時間點均逐漸增高，TNF-α水平4h達峰值，達峰值后6

8、h有下降趨勢；IL-6水平6h達最高值。PV-E組與VC-E組相比較，各時間點TNF-α及IL-6水平差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（aP＜0.05）。
　　結(jié)論：
　?、?利用CLP方法可成功制備腸源性膿毒癥模型，腹腔滲液經(jīng)門靜脈及腔靜脈注射均可造成大鼠急性肺損傷；
　?、?腸源性膿毒癥腹腔滲液中存在大腸桿菌為主的多種致病菌、LPS、TNF-α及IL-6等主要成分；
　?、?門靜脈組血清及肺泡灌洗液中LPS水平低于腔靜脈