乙?；D移酶Tip60影響A549細胞增殖、遷移功能的初步研究.pdf

1、[目的]
　　肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，也是全世界惡性腫瘤中致死率最高的疾病。肺癌的發(fā)生發(fā)展涉及多基因的參與，肺癌治療主要依賴傳統的手術、放療和化療，但是總體療效并不理想。目前，肺癌基因治療作為新型的治療方式，已逐漸成為肺癌的一種高效性、特異性、靶向性強的治療方法，并日益受廣大醫(yī)學工作者的重視。尋找肺癌基因治療的新靶點，進而探索肺癌增殖、遷移的分子機制，有利于肺癌的早期診治。研究發(fā)現，乙?；D移酶Tip60(HIV-tat in

2、teracting protein60kD)是一個單倍體不足(haplo-insufficient)的腫瘤抑制因子，它在肺癌組織中的基因轉錄水平較正常組織下調，肺癌組織中過表達Tip60能誘導肺癌細胞發(fā)生凋亡。但關于Tip60與肺癌增殖、遷移等分子機制的研究至今仍未見有相關文獻報道。因此，本課題擬研究Tip60對肺癌細胞增殖、遷移及衰老表型的影響，并初步探討其機制，為肺癌患者的基因治療提供一個新的思路和手段。
　　[方法]

3、　　構建了在真核細胞中能穩(wěn)定過表達Tip60的慢病毒載體，感染肺癌A549細胞建立相應的細胞系。采用qRT-PCR和Western blotting等方法驗證Tip60過表達是否成功。采用CCK-8法、細胞克隆實驗檢測細胞增殖能力，流式細胞術檢測細胞周期。Western blotting檢測肺癌細胞中周期相關蛋白CDK2、P21和P53的表達水平。采用細胞劃痕實驗、transwell細胞遷移實驗檢測細胞的遷移能力。采用衰老相關半乳糖苷酶

4、(SA-β-gal)染色實驗檢測Tip60過表達與肺癌細胞衰老表型之間的關系。
　　[結果]
　　1.成功構建Tip60過表達的A549細胞，Tip60的轉錄水平上升了30倍，蛋白水平也明顯上調。
　　2.Tip60過表達抑制了A549細胞的增殖，影響了細胞周期的分布，使A549細胞S期的分布明顯減少。
　　3.A549細胞中Tip60過表達，CDK2蛋白水平下調，P21和P53的蛋白水平均上調。
　　4.

5、Tip60過表達抑制了A549細胞的傷口愈合能力，遷移能力也明顯受限。
　　5.Tip60過表達沒有影響A549細胞衰老表型的改變。
　　[結論]
　　Tip60過表達抑制了A549細胞的增殖，抑制細胞從G1期過度到S期，這可能與CDK2水平下調，P21和P53的蛋白水平上調相關，通過這些蛋白的作用途徑影響肺癌細胞增殖。Tip60過表達抑制了A549細胞的傷口愈合能力，細胞的遷移能力也明顯受限。Tip60過表達沒有影響