可溶性表氧化物水解酶在冠狀動脈粥樣硬化病變中的表達及其意義.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是危害人類健康的常見病,其中由冠狀動脈粥樣硬化引起的心肌梗塞是AS中對人類構成威脅最大的疾病。血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的增殖和遷移在AS病變形成中起重要作用,其表型轉化是細胞增殖和遷移的先決條件。表氧-二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids,EETs)是花生四烯酸經(jīng)P450通路的代謝產(chǎn)物,被認為是內皮衍

2、生性超極化因子,可使血管平滑肌細胞超極化,從而誘導冠狀動脈舒張并降低黏附因子的表達。因此,EETs被認為是一種內源性預防高血壓、動脈粥樣硬化等血管病變的保護因子。可溶性表氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)可將EETs水解轉變?yōu)橄鄳u基衍生物二羥-二十碳三烯酸,使EETs喪失其血管保護的生物活性。有研究報道,在動物實驗中,sEH抑制劑可以減緩AS斑塊的發(fā)展,但是sEH在人類AS發(fā)展過程中的表達變化

3、及其機制尚不清楚。本課題旨在揭示sEH在人冠狀動脈粥樣硬化斑塊中的表達及其機制,為動脈粥樣硬化的治療提供新的潛在性靶點,為sEH抑制劑臨床應用的可行性提供理論基礎。
　　首先,我們收集2001-2010年汕頭大學醫(yī)學院病理學教研室法醫(yī)病理尸檢的人冠狀動脈97例,其中有冠狀動脈粥樣硬化病變者61例,對照組36例。通過蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色,根據(jù)冠脈管腔狹窄程度,將病變程度分成Ⅰ級、Ⅱ級、III級

4、和Ⅳ級。通過sEH,SMα-actin和CD68等免疫組化和麗春紅/維多利亞藍(Ponceau/Victoria blue,P/VB)染色發(fā)現(xiàn):在冠狀動脈粥樣硬化斑塊的中膜層和增生內膜層sEH蛋白水平的表達較正常組增高。其中,增生內膜層中sEH表達主要集中在病變早期的Ⅰ級或Ⅱ級標本的向內膜遷移的VSMC,提示冠脈VSMC中sEH表達增高,可能在AS的早期病變中發(fā)揮一定作用。
　　為了在細胞水平驗證以上假說,我們以不同濃度的血小板源

5、性生長因子(PDGF-BB)刺激培養(yǎng)的原代大鼠動脈平滑肌細胞,通過蛋白電泳免疫印跡分析發(fā)現(xiàn)PDGF-BB劑量依賴性增加sEH的表達。同時PDGF-BB下調VSMC分化型細胞表型轉化標志物SMα-actin、SM22α和Cnn1的表達,該作用可被特異性sEH抑制劑TUPS部分抑制。采用sEH腺病毒(Ad-sEH)在VSMC中過表達sEH的結果發(fā)現(xiàn):Ad-sEH轉染VSMC48小時后,sEH蛋白表達明顯增加,同時伴隨VSMC表型轉化的標志物

6、的改變。進一步,Transwell小室遷移實驗的結果顯示PDGF-BB處理及Ad-sEH感染的VSMC細胞遷移數(shù)目明顯增多,而TUPS可部分抑制由PDGF-BB引起的細胞遷移。
　　進一步在體動物試驗中,我們通過導絲拉傷小鼠左頸總動脈建立頸動脈內膜損傷模型,并用sEH抑制劑TUPS干預sEH的生物學活性,觀察內膜增生程度。內膜損傷術后2周,分離左、右頸總動脈,進行免疫熒光雙重染色。結果發(fā)現(xiàn)在sEH+/+組的C57對照小鼠中,左頸動

7、脈較右頸總動脈管壁增厚顯著增加(16.64±1.24μm/11.58±0.67μm,P<0.001),并有輕度的內膜增生;同時血管平滑肌層中sEH表達明顯增高;而TUPS組和sEH-/-組動脈管壁增厚程度明顯減輕(13.67±0.86μm,P=0.001;11.62±0.99μm,P<0.001)。
　　本研究首次發(fā)現(xiàn),在人冠狀動脈粥樣硬化斑塊中的中膜層和增生內膜層VSMC中sEH蛋白水平的表達增高。而增生內膜層sEH表達主要集中