當歸對宮內缺氧新生大鼠海馬神經(jīng)元與神經(jīng)膠質細胞的影響及其機制.pdf

1、目的：探討言內缺氧對新生大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元與神經(jīng)膠質細胞的影響及血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在缺氧后的表達與當歸的調控作用。方法：選擇健康雌性Sprague-Dsawley（SD）大鼠（220-250g）15只分別與一只雄性大鼠合籠配種，于第二日早晨發(fā)現(xiàn)陰栓記為雌鼠懷孕0d，記下日期，取出雄鼠，單獨飼養(yǎng)雌鼠至孕期14d。將15只孕14d大鼠隨機分為對照組（cont

2、rast group，CG）、缺氧組（hypoxia group，HG）和當歸組（Angelica group，AG），每組各5只。自孕14d開始將缺氧組孕鼠置于三氣培養(yǎng)箱中（氧濃度130mL／L，二氧化碳濃度0．3mL/L-0．4mL/L，溫度25℃，相對濕度：75%-80%），缺氧2h/d，連續(xù)缺氧5d（孕14d-18d）。每天缺氧前1h經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水（8mL/Kg）。當歸組則用250g/L的當歸注射液代替生理鹽水，余同缺氧組

3、。對照組不缺氧，余同缺氧組。三組孕鼠待其自然分娩（第21d），每只孕鼠可產(chǎn)新生鼠5-8只，每窩隨機選取新生鼠4只，取大腦組織（注：從取材后凡接觸組織的水溶性試劑中均含0．1%的DEPC）、多聚甲醛固定，石蠟包埋、經(jīng)海馬橫切面切片（厚4μm），作NES mRNA、GFAP mRNA、VEGF mRNA原位雜交步驟：①切片常規(guī)脫蠟至水。②胃蛋白酶消化，暴露核酸探針結合位點（18℃-23℃，胃蛋白酶濃度1．5mL3%檸檬酸加2滴胃蛋白酶，消化

4、6min）。③1%多聚甲醛后固定。④滴加預雜交液，40℃3h。⑤滴加探針雜交液，加蓋專用蓋片，40℃過夜。⑥沖洗后滴加生物素化鼠抗地高辛，室溫2h。⑦滴加生物素化過氧化物酶，室溫30min。⑧滴加SABC-POD，室溫30min。⑨DAB避光顯色5-10min（鏡下控制顯色時間），⑩切片常規(guī)脫水、透明、封片，400倍拍照、IPP6．0軟件分析各指標陽性細胞的積分光密度（integral light density，IOD）值，結果均以X

5、±s表示。用SPSS16．0統(tǒng)計分析軟件包進行統(tǒng)計分析（同一指標組間比較用單因素方差分析，兩兩比較用LSD檢驗）。結果：缺氧組新生鼠海馬CA3區(qū)NSE mRNA原位雜交陽性細胞IOD值較對照組減小（P<0．05），當歸組較缺氧組增大（P<0．05），均具有統(tǒng)計學意義：缺氧組GFAP mRNA原位雜交陽性細胞IOD值較對照組增大（P<0．05），當歸組較缺氧組減?。≒<0．05）；缺氧組VEGF mRNA原位雜交陽性細胞的IOD值較對照組

6、增大增大（P<0．05），當歸組VEGF mRNA陽性細胞的IOD值也較缺氧組增大（P<0．05），均具有統(tǒng)計學意義。結論：①建立了較為科學、合理的胚胎大鼠宮內缺氧動物模型。②一定時間（2h/d，持續(xù)5d）、一定濃度（130mL／L）的宮內缺氧可使新生大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元減少，神經(jīng)膠質細胞增生。③250g/L的當歸注射液可增加缺氧所致的新生大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元的數(shù)量，減弱該區(qū)神經(jīng)膠質細胞的增生，其機制可能是進一步上調缺氧后VEGF