鼻咽癌PTCH-1、SMO基因表達及Hh通路對細胞增殖研究.pdf

1、鼻咽癌是一個多因素遺傳性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展具有多階段性。遺傳因素與環(huán)境因素共同作用致使與鼻咽癌相關的多個基因發(fā)生改變，從而導致鼻咽癌的發(fā)生和發(fā)展。它是我國常見的惡性腫瘤之一，在頭頸部惡性腫瘤中占據(jù)首位。鼻咽癌在中國南方和國外中國南方移民及后裔中發(fā)病率極高，尤其是中國南方廣東省鼻咽癌發(fā)病率較歐美等其他地區(qū)高25～30倍。這種驚人的地域性和民族性特征使鼻咽癌的防、診、治在中國癌癥研究中具有特殊重要的位置。
　　 Hedgehog(Hh

2、)信號通路是一個進化保守的信號通路，在從低等動物(果蠅)到高等動物(人類)中普遍存在。Hh信號通路最初的功能是胚胎發(fā)育的組織者，隨后人們的研究又揭示了Hh在多種腫瘤的發(fā)生、分化、侵襲和轉移中起關鍵性作用。Hh信號通路的異常激活，顯著調(diào)節(jié)該通路下游目的基因的轉錄水平，可引起癌細胞的過度增殖和分化異常。在Hh信號通路中PTCH-1和SMO起著關鍵性的作用，Hh信號的接收和傳導由位于靶細胞膜上的PTCH和SMO控制。
　　 本研究選擇

3、Hh信號通路的PTCH-1和SMO作為研究對象，應用實時熒光定量PCR技術，檢測鼻咽癌組織中PTCH-1和SMO基因的表達水平，通過與鼻咽炎患者的鼻咽組織相比較，探討Hh信號通路與鼻咽癌發(fā)生之間的關系，以尋找鼻咽癌診斷和治療的生物標志物。實驗結果表明，在所檢測的全部鼻咽癌組織和鼻咽炎組織中PTCH-1和SMO都有表達。與鼻咽炎組織相比，有75％(24/32)鼻咽癌組織的PTCH-1基因表達水平下調(diào)，有68.8％(22/32)鼻咽癌組織的

4、SMO表達水平上調(diào)，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。在鼻咽癌中SMO基因普遍具有較高的表達水平，PTCH-1基因的表達水平則相對較低，而SMO基因表達水平的上調(diào)及PTCH-1基因表達水平的下調(diào)，可引起Hedgehog信號通路在鼻咽癌中的異常激活，Hedgehog信號通路的異常激活可能與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展過程相關。
　　 另外，在鼻咽癌CNE1和CNE2細胞株中，定性的檢測Hh信號通路PTCH-1和SMO基因的表達，驗證在所檢

5、測的鼻咽癌細胞株中有Hh信號通路的激活。用Hh信號通路特異性抑制劑cyclopamine，在不同劑量和時間上分別作用于低分化及高分化鼻咽癌細胞株，通過CCK-8比色法檢測細胞生長和增殖的情況。CCK-8比色法的結果顯示，cyclopamine對CNE1和CNE2細胞有增殖抑制作用，且呈劑量和時間依賴性，其中劑量效應關系較顯著。Cyclopamine劑量低于5μmol/L時，對細胞抑制作用不明顯；當劑量從5μmol/L增至40μmol/L