熊去氧膽酸對(duì)AFP-L3及r-GGTmRNA表達(dá)的影響.pdf

1、背景和目的:
　　 熊去氧膽酸(UDCA)是臨床上用于利膽、保護(hù)細(xì)胞、抗氧化、抗凋亡和免疫調(diào)節(jié)等作用的一線肝病藥物。目前國(guó)內(nèi)外研究顯示UDCA對(duì)結(jié)腸癌的發(fā)生有抑制作用，并能誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞株及乳腺癌細(xì)胞系等多種腫瘤細(xì)胞凋亡，也有研究發(fā)現(xiàn)其能抑制致癌物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的致癌作用。本文通過(guò)建立大鼠肝癌模型，探討UDCA對(duì)AFP-L3（甲胎蛋白異質(zhì)體）、大鼠肝癌組織及血液中γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶mRNA(γ-GGTmRNA)亞型表達(dá)的影響，以進(jìn)一步研

2、究UDCA對(duì)肝癌發(fā)生的影響，探討UDCA對(duì)肝癌發(fā)生的預(yù)防作用。
　　 研究對(duì)象:
　　 Wister大鼠60只，雄性，8周齡，體重(180g±10)g，購(gòu)于山東大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求分成實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組。
　　 方法:
　　 1、動(dòng)物肝癌模型的建立:將60只Wister大鼠隨機(jī)分成4組，以二乙基亞硝銨(DEN)每周1次腹腔注射（60mg/kg）誘導(dǎo)大鼠肝癌形成。①肝癌組24只;②UDCA組24只（給

3、予含4g/L的UDCA飲用水）;③正常對(duì)照組10只;④UDCA對(duì)照組10只。
　　 2、從第6周起，每4周各組均處死一批大鼠，稱大鼠體重，取其肝臟稱重，結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)及計(jì)算肝/體重比，并作病理學(xué)以了解肝癌發(fā)展的進(jìn)展。心臟采血2ml，用ELISA法檢測(cè)大鼠血清中AFP-L3的水平。
　　 3、取正常組與肝癌組大鼠的血液及肝組織，分別提取RNA，采用普通PCR檢測(cè)γ-GGTmRNA亞型(F、 H、P)的表達(dá)情況。
　　 4

4、、采用實(shí)時(shí)定量PT-PCR檢測(cè)大鼠肝組織及血液中γ-GGTmRNA-H亞型在不同組各時(shí)間段的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1、在第10周時(shí)實(shí)驗(yàn)組肝表面均出現(xiàn)結(jié)節(jié)，病理結(jié)果顯示:肝硬化伴不典型增生結(jié)節(jié)，假小葉內(nèi)的肝細(xì)胞出現(xiàn)異型性，出現(xiàn)早期肝癌的表現(xiàn)。第14周結(jié)節(jié)明顯比第10周增多，病理顯示出典型肝癌表現(xiàn)。肝癌組大鼠的成瘤率為75％(15/20)，UDCA組的為45％(9/20)。UDCA組肝臟結(jié)節(jié)數(shù)量均少于肝癌組大鼠(P

5、＜0.05)，肝重及肝/體重比均低于肝癌組(P＜0.05)。
　　 2、γ-GGTmRNA亞型的分布情況:在大鼠肝組織中只表達(dá)F與H亞型，P亞型不表達(dá)。H亞型在癌組織的陽(yáng)性檢出率顯著高于正常肝組織(P=0.001)。F亞型在癌組織中的陽(yáng)性檢出率均少于正常組織(P=0.021)。僅在肝癌大鼠的血液中檢測(cè)出H亞型，其陽(yáng)性率達(dá)46.7％，明顯高于正常組(P=0.022)。
　　 3、AFP-L3在實(shí)驗(yàn)第10周（肝癌早期）即開(kāi)始

6、明顯升高，與第6周有顯著差異。AFP-L3絕對(duì)值在肝癌組及UDCA組中均明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)。UDCA組AFP-L3水平明顯低于肝癌組(P＜0.05)。
　　 4、γ-GGTmRNA-H亞型在第10周（肝癌早期）出現(xiàn)高表達(dá)，與第6周有明顯差異(P＜0.05)。肝癌組與UDCA組中肝組織H亞型的表達(dá)量與對(duì)照組有顯著差異(P＜0.05)。在血液及肝組織中，UDCA組中H亞型的表達(dá)均比肝癌組表達(dá)量減少(P＜0.05)。