麻黃湯不同配伍對(duì)佐使藥有效成分及指紋圖譜的影響研究.pdf

1、中醫(yī)藥是中華民族文化的瑰寶。中藥復(fù)方又稱為方劑，方劑是在辨證審因、決定治法之后，選擇適宜的藥物，按著一定的組方原則，酌定用量、用法，妥善配伍而成的。方劑是中醫(yī)用藥的主要形式，配伍是中醫(yī)用藥的優(yōu)勢(shì)與特色所在?！八幱袀€(gè)性之特長(zhǎng)，方有合群之妙用”，幾千年來，歷代醫(yī)家在長(zhǎng)期的醫(yī)療實(shí)踐中總結(jié)了完整的遣藥組方理論，中藥復(fù)方在人類與疾病作斗爭(zhēng)的過程中，充分展示了其安全有效、防病治病的作用。我國(guó)人民長(zhǎng)期的醫(yī)療實(shí)踐證明：中藥復(fù)方的綜合效能優(yōu)于單味藥。

2、 方劑配伍理論始于《黃帝內(nèi)經(jīng)》，經(jīng)過漢、唐、宋、元、明、清及當(dāng)代研究，形成了較為系統(tǒng)的理論和方法。最有代表性的是關(guān)于藥物協(xié)同或制約的“七情和合”，“七情合和”被視為配伍理論之總綱，“君臣佐使”成為方劑組成的原則，對(duì)后世影響深遠(yuǎn)。 方劑配伍不是藥物的簡(jiǎn)單堆砌，它體現(xiàn)了豐富的制方學(xué)理和蘊(yùn)涵著臨證組方的客觀規(guī)律。中藥配伍理論具有深?yuàn)W的科學(xué)內(nèi)涵，運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)、現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)手段對(duì)方劑配伍規(guī)律進(jìn)行研究，具有深刻的意義：可進(jìn)一步揭示方劑配

3、伍的客觀規(guī)律與科學(xué)內(nèi)涵，闡明方劑防治疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)理，在更廣的范圍、更深的層次展現(xiàn)中醫(yī)治療疾病的科學(xué)原理；對(duì)于創(chuàng)制優(yōu)質(zhì)高效、成分清楚、作用機(jī)制明確的中藥新制劑具有重要指導(dǎo)作用；可促進(jìn)中醫(yī)理論的發(fā)展，推動(dòng)中醫(yī)藥走向世界。 對(duì)于方劑配伍規(guī)律的現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)研究，主要有兩種方法。其一是用藥理研究方法，觀察方劑配伍與藥理效應(yīng)變化之間的關(guān)系，通過配伍前后藥理效應(yīng)的變化探討配伍的意義；其二是用化學(xué)研究方法，觀察方劑配伍與化學(xué)成分變化間的關(guān)

4、系，從配伍前后體內(nèi)、體外物質(zhì)基礎(chǔ)的變化探討方劑的配伍內(nèi)涵。 麻黃湯為醫(yī)圣張仲景名方，出自《傷寒論》，由麻黃、桂枝、苦杏仁、甘草組成。有發(fā)汗解表，宣肺平喘之功效，原用于太陽傷寒表實(shí)證(或稱外感風(fēng)寒表實(shí)證)，現(xiàn)代主要用于上呼吸道感染、流感、急性支氣管炎、支氣管哮喘等。麻黃湯藥味不多，組方簡(jiǎn)明，配伍精當(dāng)，是歷代中醫(yī)學(xué)家倍為推崇的著名方劑，也是各版教材用以闡明方劑組成原則的首選方劑。按中醫(yī)組方理論分析，方中君臣佐使皆備：麻黃為君藥；桂枝

5、為臣藥；杏仁為佐藥；甘草為使藥，蘊(yùn)含著深?yuàn)W的組方原理。選用此方研究方劑配伍規(guī)律具有一定的代表意義。 對(duì)于麻黃湯全方的研究，主要集中在藥理方面。全方化學(xué)方面的研究較少。對(duì)于其由于配伍因素引起的體外化學(xué)成分的變化則只有本課題組的研究論文：課題組其他成員分別研究了配伍對(duì)君藥麻黃的有效成分麻黃堿與偽麻黃堿煎出量的影響和配伍對(duì)臣藥桂枝有效成分桂皮醛含量的影響。配伍對(duì)麻黃湯中佐藥杏仁、使藥甘草主要效應(yīng)成分的影響未見文獻(xiàn)報(bào)道。 本文應(yīng)

6、用化學(xué)研究方法，以麻黃湯為代表方，通過對(duì)麻黃湯的拆方研究，觀察配伍變化與佐、使藥化學(xué)成份變化之間的關(guān)系，探討配伍合煎后苦杏仁苷、甘草酸及甘草指紋圖譜的變化規(guī)律，從配伍前后佐藥、使藥主要成分變化的層面上闡述麻黃湯配伍規(guī)律，以期從物質(zhì)基礎(chǔ)的角度為方劑配伍規(guī)律提供合理的解釋，并為繼續(xù)深入研究麻黃湯的組方原理打下基礎(chǔ)。 目的：(1)建立苦杏仁藥材中苦杏仁苷含量測(cè)定方法，選擇合適的苦杏仁藥材供本課題研究。 (2)建立麻黃湯中佐

7、藥苦杏仁的有效成分苦杏仁苷的含量測(cè)定方法，研究麻黃湯不同配伍對(duì)苦杏仁苷煎出量的影響。 (3)建立麻黃湯中使藥甘草的有效成分甘草酸的含量測(cè)定方法，研究麻黃湯不同配伍對(duì)甘草酸煎出量的影響。(4)建立甘草藥材指紋圖譜和麻黃湯中甘草指紋圖譜，研究麻黃湯不同配伍對(duì)甘草指紋圖譜主要共有指紋峰峰面積的影響。 方法：(1)采用傳統(tǒng)的中藥水煎方法，用正交設(shè)計(jì)對(duì)麻黃湯進(jìn)行拆方分組，制備麻黃湯各配伍組合水煎液。水煎液樣品經(jīng)簡(jiǎn)單的醇沉處理后制備

8、供試液。 (2)應(yīng)用HPLC-ELSD法測(cè)定苦杏仁藥材中苦杏仁苷，色譜柱為Hypersil-ODS(4.0mmx250mm，5μm)；流動(dòng)相為甲醇-水(30：70)，流速0.5 mL·min<'-1>；柱溫25℃；ELSD檢測(cè)器，漂移管溫度：98℃，載氣流速：3.2 L·min<'-1>： (3)應(yīng)用反相高效液相色譜法測(cè)定麻黃湯各配伍組合水煎液中苦杏仁苷的含量。色譜柱為Hypersil ODS柱(4.0x250mm，

9、5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(15：85)，流速為0.5 mL,min<'-1>；柱溫：35℃；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm； (4)應(yīng)用反相高效液相色譜法測(cè)定麻黃湯各配伍組合煎液中甘草酸的含量。色譜柱為Zorbax S<,B>-C<,18>柱(4.6×250mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-1.5％醋酸水溶液梯度洗脫，流速為0.8：ml·min<'-1>，梯度洗脫程序?yàn)椋?～30min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)由23％線性增至45％，30

10、～35min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)由45％線性增至60％；柱溫：室溫；D A D檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm； (5)建立甘草藥材和麻黃湯各配伍組合水煎液中甘草的HPLC指紋圖譜。選用Zorbax S<,B>-C<,18>(4.6x250mm，5μm)色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-1.2％醋酸水溶液梯度洗脫，流速為0.6 mL·min<'-1>，梯度洗脫程序?yàn)椋?至70min，乙腈的體積分?jǐn)?shù)由4％升至65％；分析時(shí)間70min；柱溫：室溫；D

11、 A D檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm。 (6)應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)甘草酸、苦杏仁苷測(cè)定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果：(1)建立了苦杏仁藥材中苦杏仁苷的HPLC-ELSD定量測(cè)定方法?？嘈尤受赵?.0～15.1μg 間與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.99999；平均回收率為99.0％，RSD為2.9％(n=5)。(2)建立了麻黃湯中苦杏仁苷的HPLC定量測(cè)定方法。苦杏仁苷在101～5030ng間與峰面積線性關(guān)系良

12、好，r=0.99999；平均回收率為98.5％，RSD為1.17％(n=5)。方法簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確可靠，復(fù)方中其他成分對(duì)測(cè)定無干擾，可用于麻黃湯中苦杏仁苷的含量測(cè)定。 測(cè)定了麻黃湯各配伍組合中苦杏仁苷的含量，麻黃、桂枝、甘草對(duì)方中苦杏仁苷含量的影響沒有顯著性差異。 (3)建立了麻黃湯中甘草酸的HPLC定量測(cè)定方法。甘草酸單銨鹽在101～5050ng間與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.99999；平均回收率為102.5％，RSD

13、為1.81％(n=5)。方法快速、準(zhǔn)確、靈敏，復(fù)方中其他成分對(duì)測(cè)定無干擾，可用于麻黃湯中甘草酸的含量測(cè)定。 測(cè)定了麻黃湯各配伍組合中甘草酸的含量，麻黃、桂枝、苦杏仁對(duì)方中甘草酸含量的影響具有顯著性差異。 (4)建立了甘草藥材的HPLC指紋圖譜，標(biāo)定了甘草藥材38個(gè)共有指紋峰，方法穩(wěn)定、可靠、重復(fù)性好，符合國(guó)家藥品監(jiān)督管理局指紋圖譜測(cè)定的技術(shù)要求，可用于甘草藥材指紋圖譜的測(cè)定。 (5)建立了麻黃湯中甘草HPLC指紋

14、圖譜，標(biāo)定了麻黃湯中甘草指紋圖譜8個(gè)主要的共有指紋峰，考察了麻黃湯各配伍組合水煎液中8個(gè)主要共有指紋峰的峰面積變化。麻黃、杏仁顯著影響甘草8個(gè)共有指紋峰的峰面積，使8個(gè)峰的峰面積顯著降低；桂枝顯著影響甘草6個(gè)共有指紋峰的峰面積，使6個(gè)峰的峰面顯著降低；全方配伍顯著影響甘草8個(gè)共有指紋峰的峰面積，使8個(gè)峰的峰面積顯著降低。 結(jié)論：麻黃湯各組方配伍對(duì)佐藥苦杏仁有效成分苦杏仁苷、對(duì)使藥甘草有效成分甘草酸及甘草指紋圖譜的影響具有一定的規(guī)

15、律性。與單味藥材相比，麻黃湯不同配伍使佐藥苦杏仁和使藥甘草的某些化學(xué)成分發(fā)生了量的變化，提示：方劑配伍后由于藥效物質(zhì)基礎(chǔ)發(fā)生了變化，從而產(chǎn)生了不同的藥理效應(yīng)和治療作用。 本課題創(chuàng)新之處： (1)首次對(duì)麻黃湯進(jìn)行拆方組合后，從佐藥、使藥的有效成分苦杏仁苷、甘草酸的變化層面上闡述麻黃湯配伍規(guī)律；首次研究麻黃湯不同配伍對(duì)使藥甘草指紋圖譜發(fā)生的影響。研究結(jié)果為深入研究麻黃湯組方原理奠定了基礎(chǔ)，也為方劑配伍規(guī)律的現(xiàn)代研究提供一個(gè)可