Fcα-μR介導補體對人腎小球系膜細胞的殺傷.pdf

1、本論文分為兩部分，第一部分針對Fcα/μR在人腎小球系膜細胞上的功能和在IgM腎?。↖gMN）發(fā)病中可能的病理意義進行了探索。IgMN是以腎小球系膜區(qū)IgM沉積為主的原發(fā)性系膜增生性腎小球腎炎，但是IgM及IgM-IC在系膜區(qū)沉積的機制一直不明確。Fcα/μR是能夠和IgA或IgM以中等親和力或高親和力結(jié)合的Fc受體，并在原代培養(yǎng)的腎小球系膜細胞中發(fā)現(xiàn)有表達。為了研究Fcα/μR是否可能促進IgM及IgM-IC在腎小球系膜細胞上沉積，本

2、實驗建立了表達人Fcα/μR的HMC細胞系，并對其結(jié)合IgM，IgA及IgM-IC的情況進行了鑒定。在建立細胞穩(wěn)定株過程中，嘗試使用逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法后，最后選定利用脂質(zhì)體將Fcα/μR cDNA轉(zhuǎn)染入人腎小球系膜細胞（HMC），藥物篩選后進行克隆化培養(yǎng)。利用Western blot檢測到Fcα/μR在HMC中表達，激光共聚焦顯微術(shù)檢測到其在細胞膜的表達。用流式細胞術(shù)與激光共聚焦顯微術(shù)檢測到IgM，IgA以及IgM-IC

3、能通過Fcα/μR與HMC-Fcα/μR結(jié)合?？紤]到IgMN中IgM沉積常伴有補體C3片段沉積，而IgM-IC是很強的補體激活劑，我們又對HMC-Fcα/μR結(jié)合IgM-IC以后介導補體對細胞的殺傷情況進行了研究。用臺盼藍染色檢測補體介導的細胞殺傷作用。在補體作用下，HMC-Fcα/μR死亡率顯著高于對照組野生型細胞，空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞及無IgM-IC結(jié)合的HMC-Fcα/μR（P<0.001）。以上結(jié)果表明，F(xiàn)cα/μR能結(jié)合IgM-I

4、C并介導補體殺傷人腎小球系膜細胞。
　　 第二部分主要探討了IgAN病人外周血B細胞永生化的方法。為了對IgAN中異常糖基化IgA1的來源進行研究，需要有充分穩(wěn)定的分泌IgA1細胞樣本，但是臨床樣本十分有限，所以有必要采用EB病毒轉(zhuǎn)化病人外周血B細胞的方法，來獲得永生化的細胞系。通過實驗成功建立起了IgAN病人，其他腎病病人和正常人的永生化B細胞系，并建立起可以用雙抗體夾心ELISA檢測IgA的方法，利用這種方法檢測到永生化細胞