重組腺病毒介導(dǎo)人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因治療膠質(zhì)瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：
　　本研究旨在探討腺病毒載體(AdV)介導(dǎo)的人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因?qū)δz質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡效應(yīng)和免疫原性影響，以及動(dòng)物在體實(shí)驗(yàn)中對(duì)膠質(zhì)瘤的治療效果，為進(jìn)一步膠質(zhì)瘤的聯(lián)合基因治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　研究方法：
　　確定適宜的AdV感染倍數(shù)（MOI），選用膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251和U87為模型細(xì)胞，以攜帶人WT-p53、GM-CSF、B7-1的AdV（BB-102）轉(zhuǎn)染U251和U87細(xì)胞后，以Wes

2、tern印跡雜交法檢測(cè)WT-p53基因的表達(dá)，ELISA法檢測(cè)GM-CSF基因的表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)B7-1基因的表達(dá)。臺(tái)盼藍(lán)染色法觀察細(xì)胞存活，繪制生長(zhǎng)曲線。PI-Hoechst33342染色法檢測(cè)凋亡效應(yīng)。MLR反應(yīng)觀察其對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞免疫原性的影響。并觀察BB-102介導(dǎo)的目的基因體外修飾膠質(zhì)瘤細(xì)胞激活細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）反應(yīng)。在體實(shí)驗(yàn)通過(guò)利用非肥胖糖尿病/嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠重建人免疫系統(tǒng)和皮下移植人膠

3、質(zhì)瘤的模型，然后接種經(jīng)BB-102基因修飾的膠質(zhì)瘤瘤苗，激發(fā)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而對(duì)瘤苗的免疫保護(hù)作用進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果：
　　AdV能夠有效轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率與MOI在一定范圍內(nèi)呈正相關(guān)，適宜的MOI為200pfu/cell。重組腺病毒BB-102能夠有效地將其所攜帶的三種目的基因?qū)肽z質(zhì)瘤細(xì)胞并使其在細(xì)胞中高效表達(dá)，同時(shí)能抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)其免疫原性并可以激活淋巴細(xì)胞的CTL反應(yīng)。應(yīng)