山羊PBMC捻轉血矛線蟲Galectin受體TMEM63A和TMEM147的部分功能研究.pdf

1、捻轉血矛線蟲（Haemonchus contortus）是一種寄生于反芻動物的胃腸道線蟲，能夠導致感染動物貧血、消瘦甚至死亡。半乳糖結合凝集素(galectin)是一種糖結合蛋白，能夠顯著調節(jié)寄生蟲-宿主之間的相互作用。Hco-gal-m和Hco-gal-f是由本實驗室分別從捻轉血矛線蟲的雄蟲和雌蟲體內(nèi)克隆得到的半乳糖結合凝集素。研究表明，重組Hco-gal-rm/f(rHco-gal-m/f)能夠結合在山羊外周血淋巴細胞(PBMC)表

2、面，誘導山羊PBMC的凋亡，對細胞因子分泌、細胞遷移、細胞增殖和分化等產(chǎn)生影響。這些研究結果提示，rHco-gal-m/f可能作為一種多功能的免疫調節(jié)因子參與捻轉血矛線蟲感染過程中的宿主免疫。TMEM63A和TMEM147是捻轉血矛線蟲galectin在山羊PBMC中的受體，分布于大多數(shù)的山羊外周血淋巴細胞。研究表明，TMEM63A能夠影響Hco-gal-m/f對山羊PBMC大部分功能的調節(jié)，然而具體的分子機制以及TMEM147在其中的

3、作用還是未知。對TMEM63A和TMEM147的功能研究有利于進一步探索捻轉血矛線蟲的免疫逃避機制，并為預防和控制捻轉血矛線蟲病提供了新的思路。
　　1山羊外周血淋巴內(nèi)TMEM63A結合分子的鑒定
　　本研究的目的是為了鑒定山羊外周血淋巴細胞中能與TMEM63A結合的分子。首先通過免疫共沉淀技術收集山羊外周血淋巴細胞中與TMEM63A結合的分子，用鳥槍法——液相色譜質譜/質譜聯(lián)用(shotgun LC-MS/MS)進行蛋白的

4、質譜鑒定。結果顯示，共有43種蛋白被鑒定，包括antigen processing and presentation通路中的MHC classⅠantigen(MHCⅠ)，toll-like receptor signaling pathway通路中的toll-like receptor9(TLR-9)，hedgehog signaling pathway通路中的Gli3 protein(Gli3)，VEGF signalingpath

5、way通路中的heat shock27 kDa protein1(HSP27)，p53 signaling pathway通路中的Bcl-2-associated X protein(BAX)以及Notch signaling pathway通路中的Deltex-2protein(DTX2)。這些蛋白可能參與到Hco-gal-m/f對山羊外周血淋巴細胞的功能調節(jié)中，為更好地理解Hco-gal-m/f介導的免疫調節(jié)的分子機制提供了新的線索

6、。
　　2 TMEM63A對PBMC相關信號通路的影響
　　根據(jù)KEGG數(shù)據(jù)庫，選取了6條信號通路中的45個關鍵分子。應用實時定量PCR的方法對TMEM63A干擾前后的山羊PBMC進行相關信號通路分析。結果表明，TMEM63A的干擾對Gli3和DTX2的mRNA轉錄水平?jīng)]有顯著影響，然而MHCⅠ、TLR-9、HSP27、BAX及其所在信號通路關鍵分子的mRNA轉錄水平卻在TMEM63A干擾后發(fā)生顯著變化。對TMEM63A相關

7、信號通路的研究為探尋TMEM63A的作用靶位點和研究Hco-gal-m/f的免疫調節(jié)機制提供了新的線索。
　　3 TMEM147在Hco-Gal-m/f調節(jié)山羊PBMC功能中的作用
　　實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，TMEM147在酵母雙雜交中也能夠與捻轉血矛線蟲galectin結合。為了探索TMEM147和TMEM63A在Hco-gal-m/f調節(jié)山羊PBMC功能中的不同影響，本文通過RNA干擾技術對TMEM147的功能進行了初步研

8、究。在體外干擾48小時之后，加入rHco-gal-m共孵育12小時，然后對山羊外周血淋巴細胞的增殖、NO分泌、吞噬、遷移和凋亡進行檢測。分析結果表明，TMEM147的干擾能夠顯著影響Hco-gal-m/f對山羊PBMC的細胞增殖、NO分泌、細胞吞噬和細胞凋亡的調節(jié)作用，而對細胞遷移的作用不顯著。對Hco-gal-m/f受體TMEM147的功能研究有助于進一步闡明Hco-gal-m/f介導的免疫調節(jié)機制，為探尋捻轉血矛線蟲免疫逃避的分子機