肌漿網(wǎng)鈣-ATP酶及線粒體ATP敏感性鉀通道介導的預適應心肌保護作用.pdf

1、肌漿網(wǎng)鈣-ATP酶及線粒體ATP敏感性鉀通道介導的預適應心肌保護作用 [目的及背景]：缺血預適應(IPC)是一種抗心肌缺血再灌注損傷(I/R)的內源性保護途徑。而近年來的研究發(fā)現(xiàn)一些藥物可以誘導預適應保護作用。預適應的機制目前仍不完全清楚，許多研究表明延緩細胞內鈣超載是IPC的共同途徑，而IPC則可通過影響肌漿網(wǎng)鈣-ATP酶(SERCA)功能參與延緩鈣超載的發(fā)生。而SERCA如何參與其中尚不清楚。線粒體ATP敏感性鉀通道(mit

2、oKATP)的開放目前被認為是參與IPC的一個重要的因素。而有研究表明mitoKATP的開放影響了I/R胞內鈣分布而發(fā)揮心肌保護作用的。本實驗意在探討IPC和兩種藥物(腺苷及前胡丙素)誘導的早期預適應對心肌的保護作用，并在此基礎上探討SERCA及mitoKATP在其中所起的作用，以及兩者之間的關系。 [方法]：①酶消化法培養(yǎng)新生SD大鼠原代心肌細胞②參照koyama等的方法制作體外培養(yǎng)心肌細胞的缺氧/復氧損傷模型③臺盼藍拒染法檢

3、測心肌細胞存活指數(shù)，全自動生化分析儀檢測心肌細胞內乳酸脫氫酶(LDH)的漏出量，以觀察早期預適應對心肌細胞不同時間段缺氧(6h，10h，16h)/復氧2h損傷的保護作用及mitoKATP在其中的作用④采用改良的p-NPP法觀察預適應對不同時間段缺氧(6h，10h，16h)/復氧2h時SERCA活性的影響及mitoKATP在其中的作用⑤半定量RT-PCR法檢測預適應對缺氧10h/復氧2h時SERCA2a轉錄水平的影響及mitoKATP在其

4、中的作用。 [結果]：①原代培養(yǎng)結果顯示心肌細胞呈菱形，不規(guī)則形，搏動頻率80-100次/分。②利用自制的缺氧盒，測得培養(yǎng)液中氧分壓均小于4.0Kpa，隨著缺氧時間的延長，缺氧/復氧組較正常培養(yǎng)組細胞損傷明顯逐漸增強。③6h缺氧2h復氧時各組間細胞損傷指標無顯著差異；缺氧預適應及前胡丙素預適應組在10h及16h缺氧2h復氧后，均能表現(xiàn)出一定的抗心肌細胞損傷作用(p＜0.05)。腺苷預適應只是在10h缺氧2h復氧時存在一定的保護作

5、用(p＜0.01)，對于更長時間的缺氧，這一保護作用消失。給予5-HD后，缺氧預適應組及前胡丙素預適應組的保護作用減弱(p＜0.05)，但對腺苷預適應無明顯影響。④6h缺氧2h復氧時各組間SERCA活性無顯著差異。10h及16h缺氧2h復氧后，缺氧/復氧組較正常培養(yǎng)組肌漿網(wǎng)鈣-ATP酶活性顯著下降(p＜0.01)。缺氧預適應及前胡丙素預適應則能緩解這種下降的趨勢(p＜0.05)。而在腺苷預適應組未觀察到這種作用。給予5-HD后，缺氧預適

6、應及前胡丙素預適應的這種保護作用減弱(p＜0.05)。⑤缺氧/復氧組SERCA2a轉錄水平較正常培養(yǎng)組顯著下降(p＜0.01)。缺氧預適應及前胡丙素預適應則能逆轉缺氧/復氧對SERCA2a轉錄的抑制作用(p＜0.05)。而腺苷預適應無此作用。而給予5-HD后，減弱了缺氧預適應及前胡丙素預適應的這種作用(p＜0.05)。 [結論]：①缺氧預適應、腺苷預適應及前胡丙素預適應均能產(chǎn)生對缺氧/復氧損傷心肌細胞的早期相保護作用。②mito