維甲酸誘導神經母細胞瘤分化的蛋白質組學研究——Cyclophilin A在神經分化中的作用.pdf

1、論文題目中國協(xié)和醫(yī)科大學博士學位論文礦761928維甲酸誘導神經母細胞瘤分化的蛋白質組學研究——CyclophilinA在神經分化中的作用研究生姓名：彭鯤鵬導師姓名：袁建剛教授強伯勤教授彭小忠副教授學科專業(yè)：生物化學與分子生物學研究方向：神經系統(tǒng)疾病的蛋白質組學入學時間：2001年8月所在院所：中國協(xié)和醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所二00四年六月北京采畿黼勿全_文公在“!璺墊塑墾型查莖堅圭蘭垡絲蘭泛，在腦組織中表達最高，

2、但是CyclophilinA在神經系統(tǒng)的功能還不清楚。sH—SY5Y誘導分化后CyelophilinA表達降低，這種降低所代表的意義是我們感興趣的問題。已有研究表明，熱休克蛋白HSP90具有分子伴侶功能，在神經元分化中表達降低，并且過表達HSP90可以抑制維甲酸誘導的神經母細胞瘤分化。作為具有分子伴侶活性的另一種蛋白，我們假設CyclophilinA也具有類似的功能。因此我們將cyclophilinA克隆到真核表達載體pcDNA3I／m

3、yc—His()B中，并將其轉染SH—SY5Y細胞，經抗生素G418篩選，并經RTPCR和Western印跡驗證，證明得到過表達CyclophilinA的穩(wěn)定轉染細胞。用維甲酸同樣處理，發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定表達CyclophilinA的SHSY5Y細胞可以阻礙細胞分化過程，但不能完全抑制。Western印跡分析表明，分化后的細胞中NFM和cRet表達都增加，與未轉染細胞和轉染空載體細胞一致。但是Western印跡檢測PCNA(增殖細胞核抗原)發(fā)現(xiàn)，

4、轉染cyclophilinA的細胞誘導分化后PCNA仍有一定表達，而未轉染細胞和轉染空載體細胞誘導分化后檢測不到PCNA表達。隨后測定分化后細胞的生長曲線，與Western檢測結果一致，轉染CyelophilinA的細胞增殖速度高于未轉染細胞和轉染空載體的細胞。因此我們推測，CyclophilinA可以阻礙神經母細胞瘤細胞的分化過程，并進而影響細胞增殖速度。為尋找神經組織中與CyclophilinA相互作用的蛋白質，從而為揭示相關的生化

5、通路提供線索，本研究以CyclophilinA為誘餌，用酵母雙雜交篩選人胎腦cDNA文庫，發(fā)現(xiàn)CyclophilinA可以與多種己知參與神經元分化的蛋白質相互作用，另外與CyclophilinA相互作用韻蛋白質中有相當一部分是與細胞骨架相關的蛋白質，這些相互作用信息提示我們，CyckIphilinA可能通過它們參與神經元發(fā)育分化過程。本研究前期工作中用蛋白質組學方法尋找維甲酸誘導神經元分化前后差異表達的蛋白，并期望從這些差異蛋白質分析維