慢性阻塞性肺病易感單核苷酸多態(tài)性位點篩查及基因功能探究.pdf

1、背景：吸煙是慢性阻塞性肺病(COPD)的高危因素，但只有20％的吸煙者最終發(fā)展為COPD，提示該病是在環(huán)境與基因的共同作用下形成的。在歐美人群中進行的全基因組關聯分析（Genome-wideassociationstudies，GWASs）已揭示了部分與該病相關的基因DNA序列變異，即單核苷酸多態(tài)性（Single-nucleotidepolymorphisms，SNPs）位點，而針對中國人群的大量SNPs位點研究較少。COPD起病隱匿，

2、導致該病診斷率低，早期診斷、早期干預是研究的重點，需要建立能預測COPD發(fā)病風險的評估工具。前期研究發(fā)現人音猬因子相互作用蛋白基因（HHIP)上的某些SNPs位點與COPD易感性相關，且患者肺組織內存在該基因的低表達，提示HHIP基因參與了COPD的發(fā)病，但其在吸煙所致的氣道炎癥中的作用如何鮮有報道。前期研究還發(fā)現一些炎癥介質基因上的某些SNPs位點也與COPD易感性關聯，這些位點的多態(tài)性是否進一步引起了基因表達水平的變化，導致基因功能

3、的改變，有待探討。
　　目的：在眾多可能相關的SNPs中篩選出與COPD易感性關聯的位點;運用環(huán)境因素等信息與遺傳學標記，建立發(fā)病風險預測評估的回歸方程;探討HHIP基因對吸煙所致的氣道炎癥的調控機制以闡明該基因在發(fā)病中的作用;對部分炎癥介質基因的SNPs與外周循環(huán)中的含量進行關聯分析。
　　方法：(1)采用病例-對照方法，運用MassArray技術平臺，對97個SNPs進行血液DNA樣本基因分型，經卡方檢驗與logisti

4、c分析篩選出與易感性相關的位點。(2)采集病例-對照組的臨床信息，綜合遺傳學指標，經logistic多因素分析，建立COPD風險預測評估模型。(3)以人肺泡上皮細胞A549細胞系為研究對象，運用siRNA技術構建HHIP基因沉默細胞與正常對照細胞，經不同濃度香煙提取物刺激后，比較兩組細胞釋放的炎癥介質IL-6、IL-8、ICAM-1的表達差異。(4)根據rs1800629（TNF-α基因）、rs2241712（TGF-β1基因）、rs2

5、0541（IL-13基因）位點的基因型分組，檢測81例健康者血漿TNF-α、TGF-β1、IL-13含量，比較3種基因型組間的差異。
　　結果：(1)在331例患者與213例健康對照者的基因分型結果中發(fā)現攜帶rs2353397C（HHIP基因），rs1800629G（TNF-α基因），rs2241712A（TGF-β1基因），rs1205C（CRP基因），rs20541T（IL-13基因），rs2070600G（AGER基因），r

6、s10947233G(PPT2基因)個體COPD易感性增加，其中rs2353397C(HHIP基因)關聯程度最顯著。(2)利用331例患者與351例健康對照者的臨床信息以及SNPs位點的基因型資料，建立了logistic多因素回歸預測方程:COPD發(fā)病風險=1/[1+exp(-2.4933-1.2197×性別+1.1842×兒童時期呼吸道感染+2.4350×低出生體重+1.8524×吸煙史-1.1978×rs2070600+2.0270

7、×rs10947233+1.1913×rs10947233+0.6468×rs1800629+0.5272×rs2241712+0.4024×rs1205)]。(3)在2.5％、5％、10％濃度的香煙提取物(CSE)刺激下，HHIP基因沉默組A549細胞所釋放的介質IL-6、IL-8、ICAM-1的mRNA與蛋白表達較對照組細胞增加。(4)rs1800629（TNF-α）位點攜帶GG型的個體血漿TNF-α含量顯著高于AA型攜帶者(p=0

8、.0260)，未發(fā)現rs2241712位點與TGF-β1、rs20541位點與IL-13相關。
　　結論：(1)COPD是在環(huán)境與遺傳因素共同作用下誘發(fā)的多基因遺傳病。rs2353397(HHIP),rs1800629(TNF-α),rs2241712(TGF-β1),rs1205(CRP),rs20541(IL-13)，rs2070600(AGER),rs10947233(PPT2)與疾病易感性相關。(2)COPD發(fā)病風險預測模