地塞米松對(duì)馬兜鈴酸誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)理.pdf

1、【目的】 馬兜鈴酸腎病(aristoloehic acid nephropathy，AAN)是一類因攝入含馬兜鈴酸成分的藥物或食物導(dǎo)致腎臟損害的一類疾病。馬兜鈴酸(aristolochic acid，AA)是馬兜鈴屬植物的主要成分。馬兜鈴屬植物在國(guó)內(nèi)外都廣泛入藥使用，常用于抗風(fēng)濕、利水、通絡(luò)、婦科疾病的治療。短期大量使用含AA的中草藥可出現(xiàn)少尿型或非少尿型急性腎衰竭。長(zhǎng)期小劑量或短期過(guò)量服藥者可導(dǎo)致腎小管-間質(zhì)病變，其主要病理改

2、變是快速進(jìn)展性腎間質(zhì)纖維化。該病所致的腎損害往往在數(shù)月或1～2年內(nèi)發(fā)展到終末期腎衰竭。急性AAN可轉(zhuǎn)變成慢性AAN。目前對(duì)AAN機(jī)制研究表明，AA可致腎小管上皮細(xì)胞壞死、凋亡，小管上皮-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，AA-DNA加合物形成等。AAN的臨床表現(xiàn)特殊，發(fā)展較快，危害較大，用類固醇激素治療目前尚無(wú)定論，且未見有關(guān)激素治療的體外研究報(bào)道。本研究建立 AA 誘導(dǎo)人近端腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)凋亡的體外模型，觀察 AA對(duì)HK-2 細(xì)胞的毒性

3、作用，并研究類固醇激素類藥地塞米松(dexamethasone，DXT)對(duì)AA 誘導(dǎo)的HK-2 細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)理。 【方法】 應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)HK-2細(xì)胞。應(yīng)用乳酸脫氫酶(LDH)釋放試驗(yàn)檢測(cè)不同濃度AA 對(duì) HK-2細(xì)胞的直接毒性作用。利用相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。用Hoechst33258 染色法觀察不同濃度AA誘導(dǎo)的HK-2 細(xì)胞凋亡核形態(tài)的改變，計(jì)算細(xì)胞凋亡百分率，擬定誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞凋亡的AA

4、濃度。用Hoechst33258染色法和流式細(xì)胞技術(shù)研究不同濃度DXT對(duì)AA誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞凋亡百分率的改變。用RT-PCR法檢測(cè)各組HK-2細(xì)胞Caspase-3 mRNA 表達(dá)量的改變。用分光光度法檢測(cè)各組HK-2 細(xì)胞 Caspase-3 酶活性表達(dá)的改變。 【結(jié)果】 1．高濃度AA對(duì)HK-2細(xì)胞有直接毒性作用(5、10、20、40)μg/mlAA 對(duì) HK-2 細(xì)胞均無(wú)明顯毒性作用(P<0.05)，而(80、1

5、60)μg/mlAA對(duì)HK-2細(xì)胞有明顯直接毒性作用(P<0.001)。 2.建立AA誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞凋亡的體外模型(10、20、40)μg/mLAA 均可誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞凋亡，出現(xiàn)細(xì)胞核形態(tài)改變，周亡率增高。AA 為 40μg/mL時(shí)，細(xì)胞核形態(tài)改變最明顯和細(xì)胞凋亡比例最高(P<0.05)。故以40μg/mLAA誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞凋亡，建立體外模型。 3.DXT降低AA誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞凋亡比例(0.1、1、10、100

6、)μmol/L DXT 均可顯著降低40μg/mlAA誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞凋亡百分率，并且細(xì)胞凋亡百分率隨 DXT 濃度增高呈劑量依賴性降低(P<0.05)。 4.各組HK-2細(xì)胞 Caspase-3 mRNA 表達(dá)水平無(wú)顯著差異與正常組比較，各組 HK-2 細(xì)胞 Caspase-3mRNA 表達(dá)水平無(wú)顯著差異(P>0.05)。 5.各組HK-2細(xì)胞無(wú)Caspase-3酶活性表達(dá)與正常組比較，各組HK-2細(xì)胞無(wú)Caspas