重癥急性胰腺炎動物模型中內(nèi)皮素受體拮抗劑對P-選擇素和E-選擇素表達的影響.pdf

1、背景和目的：重癥急性胰腺炎(SAP)的發(fā)生機制十分復(fù)雜，現(xiàn)在比較公認的有以下幾大學(xué)說：1.胰酶消化學(xué)說；2.細胞因子和炎癥介質(zhì)學(xué)說；3.微循環(huán)障礙；4.感染-第二次打擊學(xué)說；5.白細胞過度激活學(xué)說。各種致病因素造成胰腺組織和細胞損傷，引起胰酶激活消化自身組織、炎癥細胞浸潤而釋放大量炎癥介質(zhì)。其中血管活性因子導(dǎo)致微循環(huán)障礙加重局部組織損害，而血小板活化因子使腸壁通透性增加，上皮屏障功能喪失，使腸道內(nèi)細菌移位至腸系膜淋巴結(jié)、腹腔、血循環(huán)中，

2、加上細胞免疫功能的下降而發(fā)生內(nèi)毒素血癥。內(nèi)毒素血癥刺激巨噬細胞釋放而引起高細胞因子血癥，并使白細胞受趨化因子的吸引、粘附分子的介導(dǎo)下發(fā)生滲出與在器官的集聚，隨后釋放大量的酸性水解酶、彈力蛋白酶、各種氧自由基損害組織造成多器官功能衰竭。由此可見，抑制白細胞集聚與過度激活在治療SAP中有著重要意義。現(xiàn)研究證實內(nèi)皮素不僅是致SAP微循環(huán)障礙的重要因子，而且與白細胞介導(dǎo)的炎癥有關(guān)聯(lián)。其受體拮抗劑不僅可以糾正血流動力學(xué)改變、穩(wěn)定毛細血管通透性和增

3、加胰腺功能性毛細血管密度，而且可抑制白細胞滾動，但后者具體機制不清。白細胞滾動是白細胞滲出的前提，從理論上講抑制了白細胞滾動就可減少白細胞滲出與集聚。由于白細胞滾動受血管內(nèi)皮細胞表面表達的P-選擇素和E-選擇素(selectin)所介導(dǎo)，因此本實驗構(gòu)建SAP動物模型，研究內(nèi)皮素受體拮抗劑(ET-RA)對P-selectin和E-selecitn表達的影響，從而探討ET-RA抑制白細胞滾動的意義及相關(guān)機制，并為ET-RA進入臨床實驗提供更

4、有力的理論基礎(chǔ)與依據(jù)。 方法：①實驗動物隨機分為：正常對照組；SAP組；SAP+BQ123組(BQ123是一種特異性內(nèi)皮素A型受體拈抗劑)。后兩組又各分為24h、48h、72h、1周時段組；②采用胰腺實質(zhì)內(nèi)注射?；悄懰徕c方法制作SAP動物模型，利用BQ123對模型進行干預(yù)；③利用血清淀粉酶、脂肪酶和光鏡下組織病理學(xué)改變對SAP模型進行評價；④光鏡下觀察各組胰腺的白細胞浸潤情況；⑤利用免疫組化SP方法檢測血管內(nèi)皮細胞膜上P-sel

5、ectin、E-selectin表達水平；⑥利用RT-PCR的方法測定內(nèi)皮細胞內(nèi)P-selectin、E-selectinmRNA生成水平。 結(jié)果：①利用胰腺實質(zhì)注射牛磺膽酸鈉的方法，復(fù)制了SAP的大鼠模型，經(jīng)血清學(xué)檢測與組織學(xué)觀察證實模型符合SAP診斷標準；②SAP+BQ123組組織損害與白細胞浸潤較SAP組明顯減輕，淀粉酶與脂肪酶明顯下降(P＜0.01)；③通過RT-PCR、免疫組織化學(xué)法觀察到，正常胰腺血管內(nèi)皮細胞無sel

6、ectin表達，而SAP組24小時P-selectin即呈現(xiàn)較強陽性表達，而E-selectin呈弱陽性表達，在48小時二者表達達到高峰，之后P-selectin表達水平緩慢下降，而E-selectin迅速下降。1周后P-selectin在胰腺仍呈較強表達，而E-selectin表達減弱甚至呈現(xiàn)陰性表達。SAP+BQ123組較SAP組可見selectin表達下調(diào)(P＜0.05)。 結(jié)論：①P-selectin與SAP長期維持炎癥