農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Chi和Glu基因轉(zhuǎn)化黃瓜的研究.pdf

1、黃瓜(Cucumis sativus L.)是葫蘆科黃瓜屬的蔬菜作物,在國內(nèi)乃至世界范圍內(nèi)栽培面積較大.真菌病害的發(fā)生給黃瓜生產(chǎn)帶來巨大的損失,制約了黃瓜的產(chǎn)量和品質(zhì)的提高.植物基因工程的快速發(fā)展為抗性育種提供了一種嶄新而有效的方法.來源于菜豆的幾丁質(zhì)酶基因(chitinase gene, Chi),其蛋白質(zhì)產(chǎn)物能夠降解含幾丁質(zhì)的真菌細(xì)胞壁,抑制真菌生長.克隆自煙草的β-1,3-葡聚糖酶基因(β-1,3-glucanase gene,

2、Glu)產(chǎn)物β-1,3-葡聚糖酶能夠降解許多真菌菌絲暴露在表面的β-1,3-葡聚糖,從而抑制真菌的生長.該實(shí)驗(yàn)建立了穩(wěn)定的黃瓜再生、轉(zhuǎn)化體系,并將Chi基因和Glu基因?qū)?個(gè)基因型的黃瓜基因組中.主要結(jié)果如下:1.對于黃瓜離體再生芽的誘導(dǎo),黃瓜萌發(fā)狀態(tài)的幼嫩子葉在MS附加2.0mg/L BA和1.0mg/L ABA的激素組合中再生最好.2.新型激素TDZ對黃瓜離體外植體的不定芽誘導(dǎo)作用不明顯,表現(xiàn)出較強(qiáng)的生長素活性,黃瓜子葉和下胚軸在

3、MS附加有低濃度TDZ的培養(yǎng)基中迅速生根.3.適量濃度的AgNO<,3>可以促進(jìn)黃瓜離體子葉的再生,通常2.0mg/L AgNO<,3>能發(fā)揮最好的效果,過量則抑制芽的再生.4.在MS附加激素2.0mg/L BA和1.0mg/L ABA,并添加有2.0mg/L AgNO<,3>時(shí),津研四號和津研七號幼嫩子葉的不定芽誘導(dǎo)率分別為92.97﹪,82.43﹪,另一基因型綠霸春的幼嫩子葉芽的再生率為94.73﹪.5.非轉(zhuǎn)化因子Km抗性測驗(yàn)表明:

4、100mg/L的卡那霉素完全抑制津研四號和津研七號的子葉再生,在此濃度下綠霸春產(chǎn)生極少的白化芽和畸形芽.6.頭孢霉素濃度在100~400mg/L范圍內(nèi)對黃瓜子葉外植體不定芽誘導(dǎo)的抑制作用不明顯.7.煙草細(xì)胞懸浮系看護(hù)培養(yǎng)對黃瓜的遺傳轉(zhuǎn)化影響不明顯.8.對部分抗性植株提取DNA,經(jīng)Multiplex PCR、Southern雜交檢測證明,外源基因已整合入黃瓜基因組中.獲得津研四號和津研七號轉(zhuǎn)基因再生植株.9.轉(zhuǎn)基因植株田間接種試驗(yàn)表明,部