組織和發(fā)育特異性表達抗病雙基因轉化甘藍型油菜及其抗病性研究.pdf

1、該實驗采用了in planta轉化方法,將外源基因導入中油821、寧RS-1、湘油13三種甘藍型油菜品種中,對轉基因植株T<,0>代和T<,1>代進行了PCR,Southern blot,RT-PCR檢測證實了外源基因已經導入并表達.通過離體葉片接種和草酸毒素法鑒定轉基因植株對菌核病的抗(耐)性.實驗的主要結果如下:1.構建了植物表達載體ApSCO(LB-P<,SAG12>-pr16-chil3b-tnos-P<,SAG12>-oxo-

2、tnos-pnos-nptII-tnos-RB).2.應用in planta轉化方法,將質粒ApSCO轉化中油821、寧RS-1、湘油13和華雙3號四種甘藍型油菜品種,除華雙3號由于收獲種子較少未獲得PCR陽性植株外,其余3個品種均獲得了轉基因植株,轉化效率在0.1﹪左右.各甘藍型油菜品種間的轉化效率無明顯差異.這種方法方便、快速且無須經過組織培養(yǎng)階段即可獲得上百株轉基因植株.該方法的成功為建立更高效的甘藍型油菜轉基因方法以及開展甘藍型

3、油菜的功能基因組研究打下了基礎.3.PCR和Southern-blot檢測證明外源基因已經導入甘藍型油菜并整合于油菜的染色體中.4.離體葉片接種結果:轉基因植株T1代19個株系的病情指數(shù)小于70﹪,轉基因植株各株系的平均病斑直徑最小的N1為1.32±0.345cm比對照小1.25cm.5.不同時期離體葉片接種結果:衰老葉片比幼嫩葉片接種后的病斑擴展速率平均小0.93cm,擴展速率差值最大的Z10-15為1.33cm.衰老葉片比幼嫩葉片接

4、種后的病斑直徑平均小0.64cm,病斑直徑差值最大的N1-7為0.96cm.這表明外援基因確實在轉基因植株的衰老葉片中表達了,并且在衰老葉片中的表達量高于在幼嫩葉片中的表達量,表現(xiàn)為表達的發(fā)育特異性.6.對Z6轉基因植株T1代進行了PCR擴增,經卡方檢測證明,陽性和陰性比為3:1.說明外源基因已經遺傳給后代,并符合孟德爾遺傳規(guī)律.7.草酸毒素法檢測結果與離體葉片接種結果成正相關,轉基因植株T1代19個株系的毒素指數(shù)小于60﹪.由于草酸毒