一株來源于商品牛血清的基因2型牛病毒性腹瀉病毒的分離鑒定及其序列分析.pdf

1、牛病毒性腹瀉/黏膜病(Bovine viral diarrhea-mucosal disease，BVD/MD)是由牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus，BVDV)感染牛引起的以發(fā)熱、腹瀉、急、慢性黏膜病及懷孕母牛流產(chǎn)或產(chǎn)死胎、畸胎，持續(xù)性感染與免疫耐受為主要特征的一種傳染病，發(fā)病率高而死亡率低。近年來，該病的廣泛流行已經(jīng)給世界養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。BVDV不僅能引起動物發(fā)病，還是生物制品(血清

2、、疫苗、干擾素)的主要污染源之一。由于商品血清常用于細胞培養(yǎng)，且很多細胞對BVDV較為易感，因此血清中若污染BVDV會給實驗室診斷和相關研究造成很大的影響。
　　 本研究通過對某商品化血清中污染的BVDV進行了連續(xù)傳代和蝕斑純化，分離得到純化的病毒，并命名為HLJ-10株。對分離得到的病毒進行形態(tài)觀察、理化特性和相關生物學特性的研究。病毒在體外細胞嗜性研究表明該病毒在MDBK和BL細胞上生長狀態(tài)良好，能感染PK-15細胞，而不感

3、染MDCK、Vero和BHK-21細胞。通過對HLJ-10株和參考株NADL生長曲線的繪制，顯示前者病毒滴度低于后者，而病毒的復制特點和增殖特性基本相同。參考GenBank上己發(fā)表的BVDV全基因組序列，設計了覆蓋全基因組的數(shù)對引物，通過RT-PCR方法，對該毒株全基因組進行分段克隆及序列測定。生物信息學分析表明，該毒株為BVDV基因2型，基因組全長12284個堿基，其中編碼區(qū)為11694 nt，共編碼3897個氨基酸，5’和3’非編碼