葡萄果實著色前后ABA代謝合成關鍵酶的基因表達分析.pdf

1、本實驗試材為玫瑰香葡萄（Vitis vinifera L.cv.Muscat Hamburg），由北京農(nóng)學院葡萄種質資源圃提供。玫瑰香葡萄，又名麝香葡萄（Muscat），歐亞種，于1871年由美國傳教士倪氏首先引入山東煙臺，1892年又從西歐引入，是我國分布最廣的品種之一，各主要葡萄產(chǎn)地均有栽培。此品種屬中晚熟品種，植株樹勢生長中等，二次結果率高，豐產(chǎn)性較好，顆粒小，口感微甜，有玫瑰香味，肉質堅實，易運輸，耐貯藏，是鮮食和釀酒兼用品種。

2、
　　 實驗于2008年到2010年進行，共分為兩部分。第一部分，花后2周開始采集果實，每7天一次，直至果實完熟，研究了玫瑰香葡萄果實的生長變化動態(tài)、相關的果實品質指標及ABA含量變化；同時探討了9-順環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶（NCED）、細胞色素P450雙加氧酶（CYP）、葡萄糖基轉移酶（GT）及β-葡萄糖酯酶（BG）在花后7-11周葡萄果實中表達量的變化規(guī)律。第二部分，果實著色初期進行不同濃度脫落酸（ABA）涂抹處理，處理濃度

3、為100 mg·kg-1和250 mg·kg-1；以噴水為對照，處理7天后采樣，研究了不同濃度ABA處理對葡萄果實著色及品質的影響。結果如下：
　　 1、涂抹ABA有利于提高葡萄果實的著色指數(shù)，隨著涂抹濃度的增加，著色指數(shù)增大；葡糖成熟時的測定結果表明，ABA提高了果粒的平均單粒重，增加了果實含糖量，以250 mg·kg-1ABA的處理效果最好，100 mg·kg-1ABA次之。
　　 2、玫瑰香葡萄果實縱橫徑變化趨勢基

4、本一致，分快-慢-快3個時期。液相色譜測定表明，果實內(nèi)可溶性糖主要為葡萄糖、果糖和蔗糖，葡萄糖和果糖變化趨勢基本一致，自著色期初期即開始快速上升，直至完熟期，其中果糖增幅大于葡萄糖；蔗糖含量較少，呈平緩上升趨勢，但增幅較??；總酸含量和pH值呈相反變化趨勢，總酸含量快速下降的同時pH值迅速升高；ABA含量伴隨著色期的發(fā)生而迅速增加，著色期后期達到高峰值，之后下降。說明果糖對果實成熟時甜度的提高起著重要作用，ABA與果實著色期密切相關。

5、r>　　 3、提取葡萄果實的總RNA，反轉錄為cDNA后，分別設計NCED、CYP、GT、BG四個基因的兼并引物，然后以葡萄cDNA為模板分別擴增出所需基因片段，根據(jù)克隆到的基因片段設計熒光引物，測定上述四個基因在葡萄花后7-11周表達量的變化。
　　 VvNCED1基因表達量在花后7-8周較高，第9周迅速降至最低值，10-11周又略有升高，但其值遠低于初始值；隨著果實著色期的啟動，VvBG1基因表達量有兩次快速升高的過程：第

6、一次升高發(fā)生在花后第7-8周，第二次升高發(fā)生在花后第9-10周，且第二次上升幅度大于第一次；VvGT1在第8周迅速升至峰值，而后大幅下降，之后變化較為平穩(wěn)；VvCYP1基因表達量隨果實成熟度的加深而逐漸升高，第9周達到最大值，然后迅速降至極低值。從以上結果可知，玫瑰香葡萄果實著色期前期ABA的積累主要歸因于VvNCED1基因的高水平表達，而后期ABA的積累則主要歸因于VvBG1基因；花后第8-9周，VvGT1和 VvCYP1均處于較高的