百棉1號體胚誘導及蛋白質變化規(guī)律的研究.pdf

1、棉花體細胞培養(yǎng)再生體系的建立對棉花遺傳改良及其生物工程具有重要意義。目前有關棉花體細胞培養(yǎng)的報道已經(jīng)很多，但是這些研究大多集中在少數(shù)的退出生產(chǎn)的模式材料上,推廣良種棉花體細胞培養(yǎng)過程中體胚誘導一直是個瓶頸。百棉1號是生產(chǎn)上正在推廣的國審棉花新品種，其體細胞組織培養(yǎng)再生體系還沒建立，這為百棉1號的進一步轉基因改良帶來不便。本研究以百棉1號和珂字312下胚軸作為材料，對其培養(yǎng)條件的進行了優(yōu)化，建立了百棉1號的體胚誘導體系。而當前大多數(shù)研究報

2、道集中在生理生化方面，本文以非胚性愈傷和胚性愈傷為材料，采用SDS-PAGE和雙向電泳技術，研究了體細胞胚胎發(fā)生過程中蛋白質的變化規(guī)律及體胚發(fā)生過程中的特異蛋白，期望為進一步完善陸地棉組織培養(yǎng)植株再生體系提供分子生物學基礎，研究主要結果如下:
　　 1、百棉1號體胚誘導體系的建立：
　　 (1)用0.1％升汞對種子消毒時間2～3分鐘最佳，此時的無菌苗生長狀態(tài)好，葉片翠綠，0.1％升汞浸泡種子超過3分鐘后,無菌苗的長勢就受

3、到影響，主要表現(xiàn)在:苗高變矮，葉片上有枯黃色斑點。
　　 (2)2，4-D對愈傷組織誘導至關重要，不添加2，4-D時，愈傷組織多為白綠色，質地致密，呈塊狀，而且出愈傷率較低。2，4-D的濃度在0.05mg/L水平左右最佳,此時可以獲得大量的愈傷組織。
　　 (3)分別單獨使用ZT、2,4-D、IBA誘導愈傷時，沒有胚性愈傷組織分化出來，而且愈傷組織增殖也不明顯，大多愈傷組織為淺綠色，底部中間多有褐化現(xiàn)象。
　　

4、(4)利用MSB+2，4-D+ZT組合和MSB+IBA+ZT組合誘導愈傷組織，培養(yǎng)一段時間后愈傷組織分化成黃灰色，疏松顆粒狀，表面發(fā)亮，濕潤的胚性愈傷組織。百棉1號胚性愈傷的分化率分別為9％和8％，珂字312胚性愈傷的分化率為18％和13％。
　　 (5)利用MSB+2，4-D+IBA+ZT誘導愈傷組織,只有在2，4-D、IBA濃度較低ZT濃度較高時，才可以分化出胚性愈傷組織，而且分化率很低，百棉1號分化率為1％，珂字312為分

5、化率2％。
　　 2、百棉1號體胚發(fā)生過程中蛋白質變化規(guī)律的研究：
　　 (1)采用TCA/丙酮法提取愈傷組織蛋白質，測定其含量，發(fā)現(xiàn)愈傷組織中總蛋白質的含量趨勢是:先升高后降低，在第四、五代達到高峰。
　　 (2)采用SDS-PAGE單向電泳技術，分析電泳圖譜，發(fā)現(xiàn)分子量為40KD和42KD的蛋白組分僅僅出現(xiàn)在百棉1號胚性愈傷中，這兩種蛋白質組分與體細胞胚發(fā)生有密切的聯(lián)系。
　　 (3)采用雙向電泳技術