豬圓環(huán)病毒2型間接ELISA試劑盒以及免疫試紙條的研制.pdf

1、抗原豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type，PCV2）能夠引起豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合癥(Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)。隨后發(fā)現(xiàn)豬皮炎腎病綜合癥(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS)、豬呼吸道疾病綜合癥（Porcine respiratory disease complex，PRDC）、

2、先天性震顫(Congenital tremor，CT)等疾病也與PCV2感染有關(guān)。因此，PCV2可給生豬生產(chǎn)帶來(lái)直接和間接損失，是一個(gè)重要的經(jīng)濟(jì)性致病因子。PCV2的兩個(gè)主要開(kāi)放閱讀框ORF1和ORF2，分別編碼病毒復(fù)制相關(guān)蛋白R(shí)ep和病毒衣殼蛋白Cap。其中，Cap蛋白石PCV2病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，具有多個(gè)抗原位點(diǎn)，在抗病毒免疫中起到重要作用。本研究以大腸桿菌表達(dá)的重組Cap蛋白為抗原，研制間接ELISA試劑盒，并以兔/鼠抗重組Cap

3、蛋白多抗研制免疫膠體金檢測(cè)試紙。研究?jī)?nèi)容及成果包括:
　　 1應(yīng)用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)重組表達(dá)了豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白，該融合蛋白具有良好的免疫原性，可作為間接ELISA試劑盒的包被抗原。
　　 2以純化的pET32a-Cap融合蛋白為包被抗原，優(yōu)化條件，建立了間接ELISA檢測(cè)方法;同時(shí)與包括豬瘟病毒(CSFV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬細(xì)小病毒(PPV)在內(nèi)的多種臨床常見(jiàn)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
　　

4、 3利用已建立的豬圓環(huán)病毒2型間接ELISA檢測(cè)方法，研制出了豬圓環(huán)病毒2型間接ELISA檢測(cè)試劑盒，可用于豬圓環(huán)病毒2型的流行病學(xué)調(diào)查以及臨床診斷。將試劑盒初步用于實(shí)驗(yàn)室保存的臨床血清檢測(cè)，結(jié)果顯示安徽、江蘇等地的豬場(chǎng)PCV2病毒抗體的陽(yáng)性率都非常高，應(yīng)引起足夠重視。
　　 4將純化得到的pET32a-Cap融合蛋白復(fù)性后免疫新西蘭家兔和ICR小鼠，制備兩種來(lái)源的pET2a-Cap融合蛋白多克隆抗體。兩種多抗純化后經(jīng)檢測(cè)，具