三角帆蚌內(nèi)臟團插核手術(shù)后免疫防御調(diào)節(jié).pdf

1、三角帆蚌是我國特有的培育淡水珍珠的主要蚌種。隨著淡水珍珠業(yè)的發(fā)展，三角帆蚌蚌病的頻發(fā)，給育珠生產(chǎn)造成很大的經(jīng)濟損失。插核手術(shù)尤其是內(nèi)臟團插核手術(shù)，操作時間長，造成的創(chuàng)傷口大，更增加了三角帆蚌疾病感染的風險率。如何增強三角帆蚌非特異性免疫系統(tǒng)，增加其抗病能力成為珍珠培育中的重要課題。三角帆蚌自身的免疫系統(tǒng)是其抵御外來病原生物入侵的屏障，主要依靠血細胞的吞噬和血淋巴中各種非特異的免疫活性因子的識別、調(diào)節(jié)和殺傷等作用。血細胞形態(tài)特征的鑒別是研

2、究雙殼類免疫學的基礎(chǔ)。為了探討內(nèi)臟團插核手術(shù)后三角帆蚌免疫防御機制，本文從血細胞形態(tài)學，免疫相關(guān)酶活性和免疫相關(guān)基因表達，以及內(nèi)臟團有核珍珠培育四個方面開展了研究。 利用相差顯微鏡、光學顯微鏡、透射電子顯微鏡和流式細胞儀對插核手術(shù)5d三角帆蚌血細胞進行了形態(tài)學研究，采用熒光定量RT-PCR方法和酶活測定方法研究了三角帆蚌插核手術(shù)后第1、2、3、5、10d免疫相關(guān)基因alpha-2巨球蛋白（α2M）的表達情況和免疫相關(guān)酶酸性磷酸酶

3、（ACP）、超氧化物歧化酶（SOD）活性變化情況。流式細胞術(shù)光散射圖譜顯示血細胞被分兩類，一類為顆粒度高的大細胞，另外一類為顆粒度低的小細胞；相差顯微鏡觀察顯示，血細胞可分為胞體暗、折光性差和胞體明亮、折光性強的兩類；Giemsa和H.E染色顯示細胞分為胞質(zhì)染色不均一、胞內(nèi)顆粒明顯和胞質(zhì)染色均一、胞內(nèi)顆粒不明顯的兩類；透射電鏡超薄切片觀察顯示，顆粒明顯的細胞胞質(zhì)內(nèi)線粒體、高爾基體等細胞器較豐富，顆粒不明顯的細胞胞質(zhì)內(nèi)細胞器較少；負染結(jié)果

4、表明血細胞主要分為表面不光滑、突起明顯和細胞表面光滑、突起較不明顯的兩類，綜合上述實驗結(jié)果，三角帆蚌血細胞從形態(tài)學可分為顆粒明顯的細胞和顆粒不明顯的透明細胞兩大類。插核手術(shù)后，顆粒細胞數(shù)量相對增加，透明細胞數(shù)量相對減少，說明顆粒細胞發(fā)揮著主要免疫功能。并且血細胞表面形態(tài)更多樣，偽足狀突起更明顯，細胞內(nèi)囊泡狀物質(zhì)增多，血細胞密度顯著增高（p<0.01），兩類細胞所占比例的變化在相差顯微鏡觀測中差異極顯著（p<0.01）。α2M基因在手術(shù)后

5、表達量增加，在第3、5d與對照組有顯著性差異。血清和血細胞中ACP活性實驗組均高于對照組，血清中ACP活性實驗組與對照組有顯著性差異，血細胞中ACP活性第1、2、3d有顯著性差異。血清中SOD活性實驗組均高于對照組，第3、5、10d有顯著性差異，血細胞中SOD的活性實驗組均低于對照組，第3d差異不顯著，其余時間差異顯著。 三角帆蚌內(nèi)臟團有核珍珠培育的初步研究證實了細胞植入法內(nèi)臟團有核珍珠培育的可行性。雖然施術(shù)貝在插核手術(shù)第10天