MMP-9、TIMP-1在兔頸動脈粥樣硬化形成過程中的表達及意義的實驗研究.pdf

1、新世紀以來，由于人們生活水平的提高、生活方式的變化，頸動脈狹窄已逐步成為人們生命健康安全威脅的主要原因之一；頸動脈狹窄的病因主要是因為頸動脈粥樣硬化（Carotid atherosclerosis，CAS）形成導致的頸動脈管腔的狹窄，其發(fā)病的概率較高，在60歲以上的人群中患頸動脈粥樣硬化性狹窄者高達9％，其好發(fā)生于頸內(nèi)動脈的起始段及頸總動脈的分叉。頸動脈的狹窄及閉塞均可導致腦缺血，從而產(chǎn)生缺血性腦卒中，嚴重的可能導致死亡。
　　近

2、年來，人們對CAS的病理生理學的認識有了明顯的轉變，CAS被認為是主動的炎癥性過程，而不單純是脂質(zhì)的浸潤。在CAS過程中，基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs))和金屬蛋白酶組織抑制因子(Tissue Inhibitor of Metalloproteinases,TIMPs)失衡會導致血管內(nèi)皮細胞外基質(zhì)和基底膜過度降解，是形成 CAS的主要原因之一。活化后的膠原酶（ MMP-9)能降解細胞外基質(zhì)

3、（Extracellular matrix ECM)，打破了ECM合成與降解的平衡，從而使膠原過多沉積,進而影響血管重構。MMPs在動脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）形成方面的研究己逐步成為近些年來研究的熱點。本實驗主要探討了兔CAS形成過程中MMP-9及TIMP-1的表達情況及其意義，旨在為CAS的形成過程中的發(fā)病機制及早期診斷提供一定的理論基礎。
　　目的：首先復制穩(wěn)定的新西蘭兔CAS模型，觀察其病理改變特征

4、,探討動脈管壁及斑塊組織中基質(zhì)金屬蛋白酶（ MMP）-9和金屬蛋白酶組織抑制因子（TIMP）-1表達水平與CAS形成的關系，建立CAS形成的重要分子機制,提供頸動脈粥樣硬化性狹窄疾病干預靶點。
　　方法：選擇新西蘭純種健康大白兔共24只，雌雄各半，體重在2.1至4.1千克之間，采用氣體干燥損傷法結合高脂食物連續(xù)飼養(yǎng)建立CAS形成動物模型；實驗分為A、B、C、D四組（每組6只），A組為空白對照（不做任何處理，普通飼料喂養(yǎng)），B組建模

5、后結合高脂食物連續(xù)飼養(yǎng)2周，C組建模后結合高脂食物連續(xù)飼養(yǎng)4周，D組建模后結合高脂食物連續(xù)飼養(yǎng)8周；建模后耳緣靜脈空氣栓塞處死，經(jīng)原頸部切口解剖頸總動脈，取得頸動脈管壁及斑塊組織，制作切片標本。HE染色法觀察頸動脈管壁變化及斑塊形成情況；免疫組織化學染色法檢測動脈管壁及斑塊內(nèi)MMP-9和TIMP-1的半定量表達；Western blot法檢測動脈管壁及斑塊組織中MMP-9和TIMP-1蛋白的相對表達水平。
　　結果：HE染色結果提

6、示，A組頸動脈內(nèi)膜光滑，局部無明顯粥樣硬化斑塊形成，而B組有少量斑塊形成，斑塊內(nèi)有少量炎性細胞浸潤，而C組和D組可見頸動脈內(nèi)膜不均勻性增厚，局部看見管腔狹窄，泡沫細胞聚集明顯增多，內(nèi)皮細胞較明顯腫脹變性，中膜平滑肌細胞增生明顯，巨噬細胞和脂質(zhì)沉積量明顯增多，較多脂質(zhì)纖維帽形成，提示CAS造模成功。免疫組織化學染色結果提示，A組管壁中可見少量MMP-9和TIMP-1染色陽性；B組動脈管壁及斑塊組織中MMP-9和TIMP-1染色陽性稍增多；

7、C組和D組動脈管壁及斑塊組織中MMP-9染色陽性明顯增多，而TIMP-1染色陽性則明顯減少， D組MMP-9染色陽性細胞及強度明顯高于C組，而TIMP-1染色陽性細胞及強度則低于C組。提示在CAS形成過程中,頸動脈管壁及斑塊組織中MMP-9的表達逐漸增高，而TIMP-1的表達則在一定程度上呈現(xiàn)下降趨勢。Western blot結果提示，A組組織中有少量MMP-9和TIMP-1蛋白表達，B組中MMP-9和TIMP-1蛋白表達水平升高，而C