茶樹兒茶素在芽中積累規(guī)律及茶樹f339;539;h2的功能分析

1、 I 摘要 摘要 茶多酚是茶樹中的多酚類化合物的總稱，主要由黃烷醇類(兒茶素類)、黃酮類、酚酸類、花青素和原花青素類構成。茶多酚中成分最多的為兒茶素類，在茶多酚中的含量比可以達到 65%至 80%。兒茶素對茶葉的品質和藥理作用起著決定性的作用，具有抗氧化、防癌、降血壓、降血脂和降血糖等功效。類黃酮 3′5′-羥基化酶(flavonoid 3′5′-hydroxylase，F(xiàn)3′5′H)是已發(fā)現(xiàn)的促進 B-環(huán) 5′端羥基化的唯有的酶類，是

2、細胞色素 P450 酶家族(CYP)中的一員。F3′5′H 是生成藍色飛燕草花色素苷的關鍵基因，所以被人們稱作“藍色基因” 。本文以茶樹品種舒茶早的芽為材料，將其分為莖尖(shoot tip，ST)和未展開的幼葉(young leaf，YL)兩部分，通過高效液相色譜（HPLC） ，二甲基乙酰胺二甲基縮醛（DMACA）染色,熒光定量 PCR（qRT-PCR）和原位雜交技術對兒茶素的積累進行研究。另外，本文在茶樹紫芽轉錄組中篩選出一個新的

3、F3′5′H 基因(CsF3′5′H2)，并在克隆CsF3′5′H2 基因的基礎上， 利用 qRT-PCR 技術分析其在不同組織器官與誘導的表達特異性；通過真核表達技術體系，替換基因信號肽，研究了 F3′5′H2 基因的體外功能。 本文對幼嫩器官的兒茶素基因表達差異的研究為兒茶素代謝途徑的關鍵基因和調控基因的挖掘奠定了理論基礎，主要研究結果如下： 1、 HPLC 分析表明 YL 的兒茶素含量高于 ST， 其中酯型兒茶素表沒食子兒茶素沒食

4、子酸酯（EGCG）和表兒茶素沒食子酸酯（ECG）的含量在 YL 中依次上升了 74%和 71.8%，而非酯型兒茶素表沒食子兒茶素（EGC） 、沒食子兒茶素（GC） 、兒茶素（C）和表兒茶素（EC）依次上升了 1.3， 4.0，1.0 和 1.2 倍。與 ST 相比，YL 中酯型兒茶素和非酯型兒茶素含量均有提高；其中，非酯型兒茶素的提高的幅度高于酯型兒茶素。 2、 利用 DMACA 染色進行兒茶素的組織定位分析， 結果表明茶樹芽中兒茶素積

5、累于幼葉葉肉細胞(包括柵欄組織和海綿組織)和芽軸，在幼葉表皮和葉原基中則沒有觀察到染色。 3、利用qRT-PCR進行兒茶素代謝的相關基因表達量分析，結果表明兒茶素代謝相關基因（PAL、C4H1、C4H2、CHS2、ANR1、DFR1、DFR1和F3′5′H1）在茶樹芽YL的相對表達量要顯著高于ST。 4、 通過基因的原位雜交技術進一步研究了茶樹芽中兒茶素代謝的相關基因表達模式，結果顯示DFR1、DFR2、LAR和ANR1基因表達在芽的葉