負載生物多酚的多重自乳化給藥體系的構建及評價.pdf

1、天然多酚類是主要存在于植物體的皮、根、葉、殼和果肉中的次級代謝物。天然多酚不僅具有抗氧化作用，還具有抑制水腫、血管生成、骨質疏松、炎癥，抗腫瘤，促進凋亡和抑制，增加毛細血管抗性，保護心血管、視網(wǎng)膜及控制體重等作用。然而部分天然多酚，尤其是表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)和白藜蘆醇，由于存在穩(wěn)定性差，溶解度低，生物利用度低等缺陷而限制其廣泛應用。研究發(fā)現(xiàn)物理包裹技術是克服這類天然多酚應用瓶頸的具有應用前景的解決方案之一。其中基于多重乳

2、液和自微乳的獨特結構和物理化學特性，兼有二者優(yōu)點的多重自乳化給藥系統(tǒng)(SDEDDS)逐漸引起了研究者的廣泛關注。隨著的研究逐漸深入，發(fā)現(xiàn)SDEDDS雖然可有效提高BCSⅢ類活性物的生物利用度，但是傳統(tǒng)的SDEDDS均用于口服且為液態(tài)，且劑型單一，通常是封裝在膠囊中或為口服液，存在制劑成分與包材存在相容性問題，以及長期貯存后可能發(fā)生泄漏或分層的風險，所以研發(fā)更為豐富體系滿足實際需要成為了一個重要的研究課題。
　　本文研究制備不同應用

3、途徑的負載生物多酚（EGCG和白藜蘆醇）的多重自乳化給藥體系，包括口服和皮膚用的體系，同時選擇兩種不同的固化策略彌補傳統(tǒng)液態(tài)體系的不足。具體內容如下:
　　(1)我們首先考察乳液穩(wěn)定指數(shù)、自乳化水平和包封率等因素，優(yōu)化得到負載EGCG和硫辛酸(ALA)的固態(tài)SDEDDS的處方。共聚焦掃描電子顯微鏡和光學顯微鏡觀察顯示固態(tài)SDEDDS在水溶液中通過緩慢的攪拌即可形成水包油包水(W/O/W)乳液的多重包裹結構。光穩(wěn)定性研究顯示固態(tài)SD

4、EDDS可有效保護EGCG，當固態(tài)SDEDDS同時負載EGCG和ALA時，EGCG的光穩(wěn)定性會進一步增加，EGCG的保留率高到80％以上。長期穩(wěn)定性考察結果顯示固態(tài)SDEDDS至少可以穩(wěn)定保存六個月以上。H2O2誘導3T3細胞氧化應激損傷模型顯示固態(tài)SDEDDS水分散液可明顯減輕氧化應激引起的損傷，而且負載活性物的SDEDDS沒有出現(xiàn)明顯的細胞毒性。細胞抗氧化活性實驗(Cellular Antioxidant Activity，CAA)

5、顯示EGCG和ALA通過固態(tài)SDEDDS包裹后依然可以較好的保留抗氧化活性。體外釋放研究顯示固態(tài)SDEDDS的緩釋與十六十八醇比例呈高度相關。體外經(jīng)皮行為研究顯示固態(tài)SDEDDS分散液可明顯增加活性物在皮膚的內的滯留量，而不透過皮膚進入接受池內，而且固態(tài)SDEDDS分散液可持續(xù)的釋放活性物透過角質層進入表皮內。
　　(2)這部分重點研究并制備了口服用固態(tài)EGCG-SDEDDS，利用偽三元相圖和模擬體外釋放優(yōu)化處方。共聚焦掃描電子顯

6、微鏡和光學顯微鏡觀察顯示固態(tài)EGCG-SDEDDS在水溶液中通過緩慢的攪拌即可形成W/O/W乳液的多重包裹結構。長期穩(wěn)定性考察結果顯示固態(tài)EGCG-SDEDDS至少可以穩(wěn)定保存六個月以上。熱重分析結果表明分析固態(tài)SDEDDS的溫度不宜超過95℃，X射線衍射和差示掃描量熱結果均表明固態(tài)脂質-單硬脂酸甘油酯為高度穩(wěn)定的β型，固態(tài)SDEDDS的脂質基質在室溫下呈固態(tài)。固態(tài)EGCG在SDEDDS中以單個分子的形式溶解在內水相或非結晶形式存在于脂

7、質中。體外細胞轉運模型結果表明固態(tài)EGCG-SDEDDS主要以依賴小窩介導的內吞穿過Caco-2細胞進入體內的。SD大鼠藥代動力學試驗表明EGCG經(jīng)SDEDDS包裹后可明顯提高血藥峰濃度(Cmax)和口服生物利用度。
　　(3)為了進一步增加活性物的包裹性和含量，以極性有機溶劑（如甘油，乙氧基二甘醇，丙二醇等）取代內水相，通過傳統(tǒng)的兩步法制備制備負載白藜蘆醇的皮膚用非水SDEDDS（trans-res-SDEDDS）。通過熒光顯微

8、鏡可以觀察到trans-res-SDEDDS在水溶液中通過緩慢的攪拌即可形成水包油包油（O/O/W）乳液的多重包裹結構。傅里葉紅外光譜結果表明白藜蘆醇被完全包裹進入非水SDEDDS中，并沒有發(fā)生任何化學反應。體外釋放研究trans-res-SDEDDS可緩慢持續(xù)釋放12小時，累積釋放可達到80％以上。穩(wěn)定性考察結果顯示EGCG-SDEDDS至少可以穩(wěn)定保存三個月以上。體外經(jīng)皮行為研究顯示trans-res-SDEDDS可明顯增加活性物在

9、皮膚的內的滯留量，而不透過皮膚進入接受池內，并可持續(xù)的釋放活性物透過角質層進入表皮內。
　　(4)以trans-res-SDEDDS為基礎，制備同時負載EGCG和白藜蘆醇的口服用液態(tài)非水SDEDDS(L-SDEDDS)。進一步通過考察固體粒子的吸附能力和吸附后的溶出度，篩選得到固態(tài)非水SDEDDS(S-SDEDDS)。掃描電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)S-SDEDDS顆粒多孔結構消失。光學顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)S-SDEDDS在水溶液中通過緩慢的攪拌

10、即可形成多重包裹結構。傅里葉紅外光譜結果表明EGCG與白藜蘆醇被完全包裹進入體系中，且沒有出現(xiàn)任何化學反應。X射線衍射結果顯示活性物在體系中是以非晶體形式包括無定型或單個分子的形式分散在體系中。穩(wěn)定性考察結果顯示S-SDEDDS至少可以穩(wěn)定保存六個月以上。SD大鼠藥代動力學試驗表明EGCG和白藜蘆醇經(jīng)SDEDDS包裹后可明顯提高Cmax和口服生物利用度。安全性評價結果顯示SDEDDS在促進活性物吸收的同時沒有對小腸粘膜和Caco-2細胞