下調miRNA146a抑制膠質瘤微環(huán)境內M2型巨噬細胞分泌IL-6的研究.pdf

1、目的：腫瘤微環(huán)境是目前研究的熱點，其中腫瘤免疫炎性微環(huán)境在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。在膠質瘤中也是如此，膠質瘤免疫炎性微環(huán)境中的主要細胞是發(fā)揮固有免疫功能的巨噬細胞，除了傳統的腫瘤抑制型M1型巨噬細胞，還有具有促進膠質瘤生長的M2型巨噬細胞。研究發(fā)現miRNA146a在M2型巨噬細胞明顯高表達，而M2型巨噬細胞可分泌IL-6，IL-6不僅可以直接促進膠質瘤細胞的生長，也可刺激M1型巨噬細胞轉變?yōu)镸2型巨噬細胞從而間接達到促腫瘤生長

2、效果。目前對于M2型巨噬細胞中miRNA146a與IL-6的關系鮮有報道。本實驗擬建立M2型巨噬細胞模型，通過慢病毒轉染下調M2型巨噬細胞中miRNA146a的表達，測定M2型巨噬細胞慢病毒干擾前后IL-6分泌的變化，以闡明miRNA146a在M2型巨噬細胞分泌IL-6中的作用。
　　方法：正常培養(yǎng)小鼠巨噬細胞系RAW264.7細胞后，使用IL-4刺激RAW264.7，免疫組化檢測刺激后的細胞的M2型巨噬細胞特性標記物CD206表

3、達，以確定刺激后的細胞為M2型細胞。將M2型巨噬細胞分為三組，轉染抑制性載體的實驗組（PC）、轉染空載體的陰性對照組（NC）與只加入完全培養(yǎng)基的空白對照組。對轉染后的三組細胞行Real-time PCR檢測miRNA146a的變化及IL-6表達的變化，GraphPad Prism5軟件對實驗數據進行統計學處理，所有數據以means±SD表示，進行t檢驗及其他相關統計學分析，P＜0.05具有統計學意義。
　　結果：RAW264.7在

4、IL-4刺激后，細胞表達CD206，極化為M2型巨噬細胞。使用慢病毒轉染，轉染抑制載體的PC組及轉染空載體的NC組在熒光顯微鏡下均表達紅色熒光示病毒已轉染。Real-Time PCR結果表明轉染抑制性載體病毒后M2型巨噬細胞中miRNA146a相對于NC組和空白對照組明顯下降（P＜0.05）），NC組與空白對照組對比無明顯變化（P＞0.05）。Real-Time PCR檢測IL-6分泌情況，結果表明轉染抑制性載體病毒后M2型巨噬細胞中I