腦膠質(zhì)瘤中NDRG2表達(dá)下調(diào)機(jī)制研究.pdf

1、人NDRG2(N-myc downstream regulated gene2)基因是本研究組用錨定引物PCR方法從正常人腦cDNA文庫(kù)中克隆得到的一個(gè)新基因，基因庫(kù)登錄號(hào)為AF159092，之后在腦膠質(zhì)瘤和瘤旁組織的消減雜交中，抑癌基因組又克隆到該基因。NDRG2為NDRG基因家族成員之一，且該基因家族成員的氨基酸組成在從低等生物到高等生物的進(jìn)化中有相當(dāng)高的保守性,提示該基因家族在細(xì)胞的生命過程中起著重要作用。而目前對(duì)于NDRG2結(jié)構(gòu)

2、和功能的研究尚處于初步階段。我們研究小組發(fā)現(xiàn)，將該基因轉(zhuǎn)染入某些腫瘤細(xì)胞系后具有抑制細(xì)胞增殖的功能，且發(fā)現(xiàn)該基因在膠質(zhì)瘤、肺癌和肝癌等十余種腫瘤組織中的表達(dá)低于相應(yīng)的癌旁組織，因此目前觀點(diǎn)認(rèn)為NDRG2可能是抑癌基因，但具體作用機(jī)制尚不清楚。
　　本實(shí)驗(yàn)首先采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)膠質(zhì)瘤中NDRG2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)NDRG2表達(dá)水平明顯低于瘤旁組織，進(jìn)一步采用BSP技術(shù)檢測(cè)膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞系中NDRG2啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài)，分

3、析NDRG2啟動(dòng)子甲基化與基因表達(dá)的關(guān)系。
　　因PI3K通路是膠質(zhì)瘤中異?；钴S的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一，AKT和PKC是其下游分子。有研究表明NDRG2是AKT、PKC的底物，本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了膠質(zhì)瘤中PI3K、AKT2、PKC-αmRNA表達(dá)，在mRNA水平探討它們與NDRG2表達(dá)的相關(guān)性。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腦膠質(zhì)瘤中NDRG2mRNA表達(dá)低于瘤旁組織，且隨膠質(zhì)瘤惡性程度增高，NDRG2表達(dá)逐漸減少；膠質(zhì)瘤組織NDRG2啟動(dòng)子區(qū)甲基化

4、陽(yáng)性率顯著多于瘤旁組織，且甲基化陽(yáng)性的Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤多于Ⅲ級(jí)、Ⅱ級(jí)膠質(zhì)瘤；病理分級(jí)間甲基化陽(yáng)性位點(diǎn)數(shù)目有差異，其中Ⅳ級(jí)與Ⅲ級(jí)間有顯著性差異；檢測(cè)的32個(gè)CpG位點(diǎn)中正向序列的前16個(gè)CpG位點(diǎn)發(fā)生甲基化的頻率顯著高于后16個(gè)CpG位點(diǎn)；細(xì)胞系中，U251發(fā)生了甲基化，SHG44未發(fā)生甲基化。說(shuō)明NDRG2的表達(dá)降低可能參與了膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展。NDRG2啟動(dòng)子區(qū)的甲基化可能是導(dǎo)致NDRG2表達(dá)下調(diào)進(jìn)而促使膠質(zhì)瘤發(fā)生惡性演變的原因之一。