胱硫醚β-合酶的原核表達、純化及其活性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、在哺乳動物中,甲硫氨酸(Met)是種必需的氨基酸,通過轉硫作用,先形成同型半胱氨酸(Hcy),再轉化為半胱氨酸(Cys)。Hcy經過兩步反應生成半胱氨酸。第一步在胱硫醚β-合酶(cystathionine beta-synthase,CBS)的作用下與絲氨酸(Ser)縮合成胱硫醚,第二步,胱硫醚在γ-裂解酶的作用下形成半胱氨酸。CBS在人體內轉硫作用中起到至關重要的作用。最近幾年的研究發(fā)現,高Hcy血癥是導致心血管疾病的一個獨立危險因素

2、。在正常情況下,CBS可使Hcy與Ser縮合為胱硫醚,代謝掉多余的Hcy。當CBS活性下降時,便引起Hcy堆積,導致高Hcy血癥。
　　構建了重組質粒pGEX-4T-1-CBS,然后轉化大腸桿菌E.coli BL21(DE3)。通過對誘導表達條件的優(yōu)化,25℃,IPTG濃度為0.2mM,誘導12h,表達出可溶蛋白。經兩次Sephrose-鎳親和層析柱純化和G-25脫鹽,thrombin酶切,由SDS-PAGE鑒定產物的分子量約63

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