14種常見感染性腹瀉致病菌基因芯片檢測(cè)方法的研究.pdf

1、感染性腹瀉是由病原微生物（病原菌、病毒）及其產(chǎn)物所引起的以腹瀉為主要特征的腸道傳染病，是全球發(fā)病率高和流行廣泛的傳染病之一，嚴(yán)重威脅著人類的健康。為了預(yù)防感染性腹瀉疾病的發(fā)生，建立有效、快速地檢測(cè)和鑒定腹瀉致病菌的方法則顯得尤為重要。
　　 近年來，隨著致病菌的不斷變異和新病原菌的出現(xiàn)，感染性腹瀉的發(fā)生呈上升趨勢(shì)，由感染性腹瀉所引起的死亡率也不容忽視，因此對(duì)感染性腹瀉的致病菌進(jìn)行及時(shí)的檢測(cè)則具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本研究以引起人類感

2、染性腹瀉常見的14種致病菌為研究對(duì)象，運(yùn)用基因芯片技術(shù)進(jìn)行分子生物學(xué)檢測(cè)方法的研究。我們分別以ITS基因、gyrB基因、toxR基因、cadF基因、dnaJ基因、ipaH基因、hugA基因?yàn)榘谢颍Y選出了針對(duì)志賀氏菌、致瀉性大腸桿菌、空腸彎曲桿菌、沙門氏菌、霍亂弧菌、擬態(tài)弧菌、河弧菌、弗尼斯弧菌、副溶血弧菌、霍利斯弧菌、少女魚弧菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、親水單胞菌和鄰單胞菌的特異分子標(biāo)識(shí)，并成功研制了感染性腹瀉致病菌的基因檢測(cè)芯片。<

3、br>　　 通過對(duì)上述特異基因進(jìn)行比對(duì)分別，我們?cè)O(shè)計(jì)了種屬特異性探針，經(jīng)過保守性和特異性的反復(fù)篩選驗(yàn)證，最終得到了特異性探針37條。進(jìn)行了雜交液、雜交時(shí)間、雜交溫度和洗滌時(shí)間等條件優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)，對(duì)芯片的特異性和靈敏度進(jìn)行了驗(yàn)證，并成功用于模擬樣品實(shí)驗(yàn)和實(shí)際樣品實(shí)驗(yàn)。
　　 本研究中基因芯片檢測(cè)腹瀉致病菌的技術(shù)是以優(yōu)化的多重PCR體系為基礎(chǔ)的。該芯片實(shí)現(xiàn)了高通量檢測(cè)致病菌的目的，即可以在一份樣品中同時(shí)檢測(cè)多種致病菌。芯片的靈敏度達(dá)