流式細胞儀精子分離及冷凍處理對牛精子生理機能的影響.pdf

1、本實驗研究了牛性控冷凍精液生產過程中的精子分離過程和冷凍處理，對牛精子生理機能的影響，并對比了不同種公牛的精子分離效果；為探索性控冷凍精液受精能力下降的原因，進一步改進和完善這項技術奠定基礎。 整個實驗分為三部分。第一部分采用熒光染色法，對牛新鮮精液、分離精液、常規(guī)凍精和性控凍精的精子活力、頂體完整率、線粒體活性和獲能狀況進行檢測，來評價分離和冷凍處理對牛精子生理機能的影響。結果表明：精液體外培養(yǎng)之初，新鮮精液與分離精液組在精子

2、活力(83.5％vs83.7％)、頂體完整率(73.7％vs76.9％)、線粒體活性(75.7％vs78.1％)和獲能(28.7％vs32.9％)上均無顯著差異(P＞0.05)；但體外培養(yǎng)4-6h時，兩組間出現了顯著性差異(精子活力：61.5％vs54.4％；頂體完整率：51.5％vs43.6％；獲能精子百分率：40.7％vs55.2％)(P＜0.05)。冷凍處理很大程度降低了未分離和分離精液的精子活力(83.5％vs52.7％，83.

3、7％vs46.3％)、頂體完整率(73.7％vs57.0％，76.9％vs53.7％)和線粒體活性(75.7％vs55.7％，78.1％vs47.1％)，同時顯著增加了獲能精子百分率(28.7％vs41.9％，32.9％vs50.1％)(P＜0.05)。結論：分離處理對牛精子生理機能的損傷要小于冷凍處理；但分離處理使精子存活期縮短，對冷凍處理的耐受性降低。 第二部分采用熒光染色法，對流式細胞儀分離精子過程中的高度稀釋、H3334

4、2染色和分離加壓操作對牛精子生理機能的影響進行檢測。結果表明：對照組與稀釋組在精子活力(46.3％vs37.8％)、頂體完整率(54.8％vs44.2％)和獲能(41.8％vs53.2％)上均存在顯著性差異(P＜0.05)；分離組與前兩組在所檢測的四個精子指標上存在顯著差異(精子活力：29.0％vs37.8％vs46.3％；頂體完整率：38.0％vs44.2％vs54.8％；線粒體活性：23.5％vs37.0％vs41.1％；獲能精子百

5、分率：62.5％vs53.2％vs41.8％)(P＜0.05)；而H33342染色組與分離組間差異不顯著(精子活力：38.3％vs39.2％；頂體完整率：43.5％vs44.1％；線粒體活性：38.7％vs38.6％；獲能精子百分率：52.0％vs52.1％)(P＞0.05)。結論：流式細胞儀分離精子過程中，分離加壓和高度稀釋是造成精子損傷的主要原因，H33342染色對精子生理機能的影響很小，無統(tǒng)計學差異。 第三部分對比了四頭荷