補腎方劑誘導骨髓間充質干細胞增殖分化的理論和實驗研究.pdf

1、研究目的:本研究在中醫(yī)學“腎藏精”理論指導下,結合現(xiàn)代干細胞生物學研究成果,分析中醫(yī)學“先天之精”與干細胞的相關性,以及腎精與骨髓間充質干細胞之間的內在聯(lián)系:觀察補。腎方劑對骨髓間充質干細胞增殖、分化的影響,探討其調控骨髓間充質干細胞增殖、分化的分子機制,以期為探索“腎藏精”理論的科學內涵以及補腎方劑的臨床應用提供理論和實驗依據(jù),為中醫(yī)藥在干細胞領域的深入研究提供新的思路。
　　 研究方法:
　　 1.理論研究:通過系統(tǒng)

2、整理與總結中醫(yī)學“精”、“先天之精”、“腎精”等理論以及現(xiàn)代干細胞研究的成果,采用比較分析的方法,對干細胞的“先天之精”屬性以及“腎精”與間充質干細胞的相關性進行全面的分析,從干細胞層面探討補腎法治療腎精虧虛相關疾病的可能機理。
　　 2.實驗研究:采用全骨髓貼壁法分離純化SD大鼠骨髓間充質干細胞;采用細胞形態(tài)學、細胞生長曲線、細胞周期、細胞表面標示檢測相結合的方法,對培養(yǎng)的rBMSCs進鑒定;采用MTT法分別檢測六味地黃丸、腎

3、氣丸、左歸丸、右歸丸—四首經(jīng)典補腎方劑水提液對體外培養(yǎng)的rBMSCs細胞毒性及增殖的影響;采用ALP活性檢測補腎方劑水提液對體外培養(yǎng)的rBMSCs骨向分化的影響;采用Westernbloting檢測經(jīng)補腎方劑水提液干預后體外培養(yǎng)的rBMSCsBMP-2蛋白的表達;采用實時熒光定量PCR檢測經(jīng)補腎方劑水提液干預后體外培養(yǎng)的rBMSCsRunx2mRNA的表達。
　　 研究結論:
　　 1.理論研究:中醫(yī)學理論之“先天之精”

4、學說與干細胞之間無論來源還是功能均具有極高的相似性,而“腎精”與間充質干細胞的關系尤為密切,間充質干細胞可以看作“腎精”功能體現(xiàn)的主要物質基礎,補腎方劑治療腎精虧虛的效應機理可能與調控間充質干細胞增殖、分化等生物學行為有關。
　　 2.實驗研究:
　　 (1)全骨髓貼壁法分離的rBMSCs符合BMSCs的生物特性,建立的rBMSCs體外培養(yǎng)體系可滿足實驗要求。
　　 (2)四首經(jīng)典補腎方劑(六味地黃丸、腎氣丸、左

5、歸丸、右歸丸)水提液均可促進體外培養(yǎng)的rBMSCs增殖,且補。腎陰(滋腎益精)方劑的作用強于補腎陽(溫腎益精)方劑。
　　 (3)四首經(jīng)典補腎方劑水提液均可促進體外培養(yǎng)的rBMSCs向成骨細胞分化,且補腎陽(溫腎益精)方劑的作用強于補腎陰(滋腎益精)方劑。
　　 (4)四首經(jīng)典補腎方劑水提液均可上調體外培養(yǎng)的rBMSCs中BMP-2的水平以及Runx2mRNA的表達,而且補腎陽(溫腎益精)方劑的作用強于補腎陰(滋腎益精)