乳鐵蛋白免疫復合物對人替代活化型巨噬細胞的逆向極化作用及其機制研究.pdf

1、乳鐵蛋白(Lactoferrin，LTF)是一種80kDa的可溶性的鐵結合糖蛋白，屬于轉鐵蛋白家族，主要存在于哺乳動物的各種外分泌液中，乳汁中的含量最高。乳鐵蛋白能夠調節(jié)鐵的吸收，同時具有抗細菌、抗真菌、抗病毒、抗腫瘤及免疫調節(jié)等多種生物學功能。而抗乳鐵蛋白的抗體是抗中性粒細胞胞漿抗體的一種，在炎癥及某些自身免疫性疾病中抗體水平增高。我們實驗室前期結果發(fā)現(xiàn)，在類風濕性關節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis，RA)患者血清中，乳

2、鐵蛋白免疫復合物(Lactoferrin immune complex，LTF-IC)水平顯著升高，提示LTF-IC在RA的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要的作用。人單核細胞來源的替代活化型巨噬細胞(Alternatively activated macrophages，M2)是一類由IL-4、IL-13、IL-10等細胞因子極化的抑制性巨噬細胞，釋放IL-10、TGF-β等抑炎性細胞因子，發(fā)揮免疫調節(jié)和組織修復的功能。在實驗室前期的工作中發(fā)現(xiàn)，

3、LTF-IC可以通過細胞表面的CD14和CD32活化人的單核細胞，釋放大量的炎性細胞因子。文獻報道，在M2細胞表面也高表達這兩個分子，因此我們推測，LTF-IC也有可能通過與人單核細胞類似的途徑活化M2細胞，使得M2從抑制性的表型往促炎的方向轉變，從而在RA的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用。
　　本研究旨在探討LTF-IC對M2細胞的極化逆轉作用，并對其分子機制進行深入研究。首先，我們用M-CSF和IL-4體外分化了M2表型的巨噬細

4、胞，用LTF-IC刺激16小時后，檢測上清中TNF，IL-1等炎性細胞因子的分泌情況，結果發(fā)現(xiàn)，LTF-IC能夠誘導 M2細胞產生大量的炎性細胞因子，并且能夠誘導 T細胞釋放IL-17。值得一提的是，LTF-IC處理過的M2細胞再次接受外來刺激如LPS時，會釋放更多的炎性細胞因子。除此之外，我們還檢測了復合物處理過的M2細胞的表型改變，結果發(fā)現(xiàn)CD14、CD163、CD206、SLC40A1等M2特異性的標志分子均明顯下調，M1特異性的

5、標志分子如CLEC5A，INHBA，ALDH1A2等則有不同程度的上調。另外，復合物處理后的M2細胞吞噬能力亦明顯降低。由此可見，LTF-IC使得M2巨噬細胞向促炎的狀態(tài)逆轉。研究了LTF-IC活化M2細胞的機制。肝素能夠阻斷LTF與其受體結合，從而阻斷LTF-IC對M2細胞的活化；且乳鐵蛋白受體CD14的阻斷型抗體也能夠顯著阻斷活化，提示LTF在LTF-IC對M2細胞的活化中起到不可或缺的作用。此外CD32(FcγRⅡ)的抗體及其下游

6、Syk的抑制劑也能夠明顯抑制 LTF-IC對M2細胞的刺激作用。通過更進一步的抑制劑阻斷實驗，我們發(fā)現(xiàn) LTF及 FcγRs的下游影響細胞存活的mTOR/AKT/PI3K共同通路亦參與LTF-IC對M2細胞的活化。M2細胞被LTF-IC活化后，通過活化Caspase-1通路釋放大量的IL-1β。本研究發(fā)現(xiàn)LTF-IC能夠誘導人單核細胞來源的M2細胞產生大量促炎性細胞因子，并使得M2細胞發(fā)生炎性轉換。且該活化作用通過LTF的受體及FcγR