Ca2+-Calpain-CDK5信號通路對耳毒性耳聾模型大鼠毛細胞死亡的調控作用.pdf

1、目的:探討CDK5/P35在耳蝸組織的空間表達情況,以及在耳毒性模型中是否通過激活周期素依賴性蛋白激酶5(Cyclin Dependent Kinase-5,CDK5)信號通路而引起耳蝸內毛細胞損傷,從而導致耳聾的發(fā)生,以期對該通路誘發(fā)的耳聾的干預。
　　方法:首先用免疫熒光組織化學法、WesternBlot、PCR的方法同時證實了在大鼠耳蝸內毛細胞確實存在CDK5及其激活劑P35的表達。急性毛細胞體外給藥檢測硫酸卡那霉素是否造成

2、毛細胞內鈣濃度的上調而引起鈣超載。在此基礎上,利用體外培養(yǎng)的耳蝸毛細胞耳毒性損傷模型,以出生后4天乳大鼠耳蝸基底膜分離進行體外培養(yǎng),收集蛋白,WesternBlot檢測各時間點細胞死亡的上游分子Calpain以及CDK5與P35的變化。體外培養(yǎng)耳蝸毛細胞隨機分為3組:空白對照組,硫酸卡那霉素處理組,硫酸卡那霉素加Roscovitine組,各組同時培養(yǎng)8h,后進行PI染色,觀察細胞死亡的水平。
　　結果:1.在大鼠耳蝸毛細胞中,螺旋

3、器部分CDK5/P35的免疫熒光組織化學、Western Blot、PCR、體外激酶反應結果均呈陽性;
　　2.體外急性給予KM會導致耳蝸毛細胞內鈣濃度的顯著提高,并呈時間依賴性;
　　3.體外培養(yǎng)耳蝸毛細胞經耳毒性藥物硫酸卡那霉素處理后,Calpain表達量上升,CDK5表達量無明顯變化,P35表達量下降,P25表達量上升;給予CDK5抑制劑Roscovitine處理后,死亡的毛細胞數(shù)量較單純給與硫酸卡納處理組有所減少。<