哮喘大鼠差異表達(dá)基因篩選及柴樸湯的干預(yù)研究.pdf

1、目的：
　　利用基因芯片技術(shù)篩選哮喘大鼠及應(yīng)用柴樸湯干預(yù)治療后不同時(shí)段肺組織中異常表達(dá)的基因，闡明哮喘的發(fā)病機(jī)制及柴樸湯作用的靶基因。
　　方法：
　　健康SD大鼠(體重150~200g)42只，隨機(jī)表隨機(jī)分為正常對(duì)照組與哮喘模型組及柴樸湯干預(yù)組。用卵蛋白（OVA）致敏激發(fā)建立大鼠哮喘模型。分別于2、4、8周處死大鼠收集肺泡灌洗液行炎性細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，取肺組織行HE染色、病理圖像分析，提取肺組織RNA行基因芯片

2、篩選，以基因表達(dá)倍數(shù)值2.0和基因表達(dá)倍數(shù)值－2.0為閾值來(lái)確定差異表達(dá)基因，然后用 GO及Pathway分析對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行功能分類(lèi)分析。并對(duì)基因芯片結(jié)果進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證。
　　結(jié)果：
　　1.各組大鼠肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)
　　對(duì)照組肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)均明顯低于哮喘模型組，差異有顯著性（P<0.01）；隨著激發(fā)時(shí)間的延長(zhǎng)，哮喘模型組及柴樸湯干預(yù)組中炎性細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)逐漸增加，差

3、異有顯著性（P<0.01）；炎性細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)在柴樸湯干預(yù)組中比哮喘模型組中均有所減少，差異有顯著性（P<0.01）。
　　2.哮喘大鼠氣道重塑的改變
　　大鼠哮喘激發(fā)后二周開(kāi)始出現(xiàn)支氣管壁周?chē)写罅垦装Y細(xì)胞浸潤(rùn),氣道平滑肌增厚,杯狀細(xì)胞增生,伴黏液高分泌,膠原過(guò)度沉積，基底膜增厚；哮喘四周組與二周組相比，氣道平滑肌明顯增厚,氣道壁更厚，差異有顯著性（P<0.01）；哮喘八周組與四周組相比，氣道平滑肌明顯增厚,管腔更狹

4、窄，差異有顯著性（P<0.01）。
　　3.各組大鼠基因芯片篩選及實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證
　　從24358條表達(dá)基因譜中，篩選出在哮喘疾病的進(jìn)展過(guò)程中及柴樸湯的治療過(guò)程中持續(xù)性差異表達(dá)2倍以上的基因有13條，它們涉及哮喘的防御反應(yīng)、免疫反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、神經(jīng)調(diào)節(jié)等功能有關(guān)。其中發(fā)現(xiàn)Mal、TPD52L1等新基因參與哮喘疾病過(guò)程。對(duì)Mal、TPD52L1基因進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證，結(jié)果顯示這兩個(gè)基因在不同組大鼠標(biāo)本中均有異常表達(dá)，且