外源性內脂素對高齡雌鼠卵巢功能的影響.pdf

1、目的：通過檢測注射外源性內脂素的高齡雌鼠卵巢組織血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和內分泌腺性血管內皮生長因子（endocrine gland vascular endothelial growth factor，EG-VEGF）的表達來探討內脂素對高齡雌鼠卵巢功能和卵子質量的影響，為臨床促排卵中卵巢低反應患者的用藥提供實驗依據。
　　方法：將兩組不同周齡段（12～1

2、6周，32～36周）的SPF級雌性SD大鼠每組各60只，每組內再隨機分為兩組。在誘導排卵的基礎上，應用外源性內脂素的作為治療組，將僅誘導排卵的一組作為對照組。第一步，誘導排卵，于發(fā)情期給予四組雌性 SD大鼠腹腔內注射15IU孕母馬血清促性腺激素，同時，治療組予100ng/ml重組鼠內脂素。第二步，注射48小時后，向治療組與對照組大鼠腹腔內注射50IU人絨毛膜促性腺激素（HCG）。第三步，立即將這些雌鼠和雄鼠進行單獨交配。第四步，交配18

3、小時后，頸椎脫臼處死雌鼠，無菌條件下取出雙側輸卵管中的受精卵進行體外培養(yǎng)；取出雙側卵巢，右側卵巢用甲醛固定，免疫組化檢測微血管密度（MVD），左側卵巢的一部分立即置于Trizol中，用于Realtime-PCR檢測卵巢VEGF、EG-VEGF的mRNA表達，另一部分則用于Western Blotting檢測VEGF、EG-VEGF的蛋白表達。實驗數(shù)據采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料以平均數(shù)±標準差（(x)±s）表示，采用

4、單因素方差分析判斷組間差異，兩組間數(shù)據比較采用SNK檢驗，P<0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　　結果：1、年輕對照組平均合子數(shù)、卵裂數(shù)、卵裂率、平均胚胎數(shù)高于大齡對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），大齡治療組高于大齡對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而年輕治療組、年輕對照組兩組之間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。2、年輕對照組卵巢 MVD、VEGF及 EG-VEGF的表達水平高于大齡對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P

5、＜0.05），大齡治療組高于大齡對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而年輕治療組、年輕對照組兩組之間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結論：1、誘導排卵的高齡雌鼠的平均合子數(shù)、卵裂數(shù)、卵裂率、平均胚胎數(shù)隨周齡的增加而下降，提示高齡雌鼠生殖能力下降。2、給予外源性內脂素后治療組高齡雌鼠的平均合子數(shù)、卵裂數(shù)、卵裂率、平均胚胎數(shù)明顯增加，提示外源性內脂素可能改善高齡雌鼠卵巢功能，提高其生殖能力。3給予外源性內脂素后高齡