新型粉防已堿衍生物H1誘導肺癌細胞凋亡及自噬的研究.pdf

1、研究目的
　　腫瘤因其高發(fā)病率和高死亡率，目前已經成為威脅人類生命健康的主要病因。但傳統(tǒng)的治療腫瘤的方法非常有限，主要包括手術、化療和放療。其中化療主要是通過化療藥物殺傷或抑制腫瘤細胞達到治療腫瘤的目的，但是化療藥物同時對正常組織或器官也產生損害或毒性作用。因此開發(fā)特異地靶向腫瘤細胞的化療藥物已迫在眉睫。
　　粉防己堿（tetrandrine）是一類主要存在于防己科植物塊根中的雙芐基異喹啉生物堿，研究顯示粉防己堿具有抗腫瘤作

2、用。H1是由四川大學王鋒鵬教授在粉防己堿的基礎上合成的一種新型的衍生物，因其在結構上進行了一定的優(yōu)化，所以H1具有更好的抗腫瘤效果。本篇論文旨在研究H1對人非小細胞肺癌細胞凋亡和自噬的影響并進一步闡明其分子機制。
　　研究方法
　　1.腫瘤細胞培養(yǎng)
　　2.磺酰羅丹明B(SRB)比色法檢測腫瘤細胞增殖
　　3.WesternBlot實驗檢測細胞內蛋白水平的變化
　　4.流式細胞術檢測細胞凋亡
　　5.

3、RNA干擾抑制相關基因的表達
　　6.在熒光顯微鏡下采用EGFP-LC3B融合蛋白來示蹤自噬的發(fā)生
　　研究成果
　　新型粉防己堿衍生物H1誘導人非小細胞肺癌細胞凋亡的研究
　　1.H1抑制A549、Calu-1、H1792、H157、H460這五種人非小細胞肺癌細胞的增殖，并且呈現(xiàn)濃度依賴性。
　　2.H1激活Calu-1、A549、H1792細胞中的凋亡蛋白酶caspase級聯(lián)反應。
　　3.H1

4、上調Calu-1、A549、H1792細胞中死亡受體DR5的表達，KnockdownDR5保護細胞免于H1誘導的細胞凋亡。
　　4.H1激活Calu-1、A549、H1792細胞中內質網應激，上調CHOP的表達。
　　5.在Calu-1、A549、H1792細胞中KnockdownCHOP，抑制H1上調DR5，進而抑制H1誘導的細胞凋亡。
　　6.H1下調Calu-1、A549、H1792細胞中的c-FLIP蛋白水平，

5、過表達c-FLIP保護細胞免于H1誘導的細胞凋亡。
　　新型粉防己堿衍生物H1誘導肺癌細胞自噬的研究
　　1.H1上調Calu-1、A549、H1792細胞中的MAP1LC3B-Ⅱ。
　　2.H1誘導Calu-1-EGFP-MAP1LC3B細胞發(fā)生熒光聚集。
　　3.在Calu-1細胞中，KnockdownATG5或ATG7抑制H1誘導的MAP1LC3B-Ⅱ上調。
　　4.在Calu-1-EGFP-MAP1

6、LC3B細胞中，KnockdownATG5或ATG7抑制H1誘導的熒光聚集。
　　5.自噬抑制劑LY294002和E64d有效的抑制了H1誘導的自噬。
　　6.在Calu-1細胞中，KnockdownATG5或ATG7促進H1誘導的細胞凋亡。
　　結論
　　1.H1誘導人非小細胞肺癌細胞凋亡進而達到抗腫瘤目的;
　　2.H1激活ERstress，通過誘導CHOP上調繼而上調DR5的表達最終誘導細胞凋亡;

7、r>　　3.抗凋亡蛋白c-FLIP參與H1誘導的肺癌細胞凋亡;
　　4.H1誘導人非小細胞肺癌細胞發(fā)生自噬;
　　5.在人非小細胞肺癌細胞中，抑制H1誘導的自噬增強H1誘導的細胞凋亡。
　　綜上所述，我們發(fā)現(xiàn)H1通過誘導人非小細胞肺癌細胞發(fā)生凋亡進而達到抗腫瘤目的。并且進一步闡述了H1誘導細胞凋亡的分子機制。H1通過激活內質網應激，上調連接內質網應激與細胞凋亡的關鍵分子CHOP，進而誘導死亡受體DR5的上調，最終誘導細