MDA-7基因的腺病毒載體構建及其腫瘤靶向治療的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構建端粒酶逆轉錄酶啟動子調控目的基因MDA-7表達的復制缺陷型腺病毒，初探MDA-7蛋白對腫瘤細胞的殺傷效應。 方法:通過基因操作技術將啟動子(hTERTp)+目的基因(MDA-7)插入到腺病毒穿梭載體中，構建復制缺陷型腺病毒AdTP-mda7；同時構建對照病毒AdTP-EGFP。在HEK293細胞中擴增，氯化銫密度梯度離心純化病毒，TCID50法測定病毒滴度，應用Western blot檢測經腺病毒傳遞的MDA-7在腫瘤

2、細胞株中表達；通過結晶紫染色實驗檢測兩種病毒對腫瘤細胞的殺傷效應差異，拍照。 結果:成功構建攜帶目的基因的腺病毒穿梭質粒pSuTP-mda7，PCR鑒定正確；成功制備腺病毒顆粒AdTP-mda7和Ad-EGFP并測得AdTP-mda7滴度為2.69×109pfu/ml、AdTP-EGFP滴度為1.8×108pfu/ml。Western blot分析，MDA-7選擇性在多種腫瘤細胞株中表達，誘導腫瘤細胞死亡，如肺腺癌細胞株A549

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