cDNA微矩陣技術(shù)的建立及其對(duì)人食管鱗狀上皮細(xì)胞癌基因表達(dá)譜的研究.pdf

1、背景與目的： 食管癌(Esophageal Carcinoma)是人類最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其死亡率在中國(guó)位居第四位，嚴(yán)重危害人類健康。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，食管癌的分子機(jī)制研究取得了長(zhǎng)足進(jìn)展，提示食管癌的發(fā)生是一個(gè)多階段、多遺傳變異累積的過(guò)程。尤其是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的cDNA微矩陣技術(shù)已經(jīng)將我們帶進(jìn)了食管癌的內(nèi)部世界，對(duì)于闡明其發(fā)生過(guò)程和癌變機(jī)理有重要作用。同時(shí)對(duì)食管癌基因表達(dá)譜的準(zhǔn)確定性將成就一個(gè)精確的分類系統(tǒng)，產(chǎn)生用于篩選

2、檢驗(yàn)的新診斷標(biāo)記物和新型治療靶點(diǎn)。目前，利用這項(xiàng)技術(shù)已積累了大量文獻(xiàn)，但國(guó)內(nèi)的研究其質(zhì)量與國(guó)際先進(jìn)水平相比尚存在較大差距，具體表現(xiàn)在：(1)、國(guó)內(nèi)迄今為止的所有腫瘤學(xué)芯片研究均采用組織勻漿法獲取腫瘤組織，無(wú)法克服其異質(zhì)性缺點(diǎn)，這極大地影響了目的細(xì)胞基因表達(dá)譜的準(zhǔn)確性；(2)、難以對(duì)小范圍病變的目的細(xì)胞進(jìn)行研究；(3)對(duì)微量的組織標(biāo)本，如微小的活檢組織無(wú)能為力。為縮小與國(guó)際先進(jìn)水平的差距，也為了準(zhǔn)確地了解河南籍食管癌基因mRNA水平表達(dá)的

3、整體面貌，本研究特建立了LCM-GMA(激光捕獲顯微分離-高可信度全基因組mRNA擴(kuò)增)聯(lián)合cDNA微陣矩技術(shù)，并分析了15例河南籍食管癌患者腫瘤細(xì)胞基因表達(dá)譜，填補(bǔ)其空白。 結(jié)論： 1、本研究建立的cDNA芯片平臺(tái)是可信、也是可行的，在篩選食管癌相關(guān)基因表達(dá)譜時(shí)具有快速、高通量、高敏度等特點(diǎn)。 2、LCM是一種有效地研究特定細(xì)胞中基因表達(dá)變化的方法，克服了組織勻漿法及顯微鏡下針挑技術(shù)所具有的異質(zhì)性缺點(diǎn)，使獲取“

4、純的目的細(xì)胞”成為現(xiàn)實(shí)。T7RNA聚合酶介導(dǎo)的高可信度全基因組mRNA擴(kuò)增(GMA)技術(shù)可進(jìn)行線性化mRNA擴(kuò)增而不改變其各基因在原始樣本中的組成成分。我們建立的LCM-GMA聯(lián)合cDNA微矩陣技術(shù)不儀可獲取“精確”的基因表達(dá)譜，而且有利于研究微小的病變組織，對(duì)于癌前病變、原位癌及浸潤(rùn)癌基因表達(dá)譜變化的研究是一個(gè)有力的技術(shù)手段。LCM-GMA-定量RT-PCR技術(shù)則能有效地分析特定細(xì)胞中單個(gè)目標(biāo)基因的表達(dá)變化。 3、高通量的基因

5、芯片技術(shù)篩選出大量ESCC相關(guān)基因，表明多個(gè)基因表達(dá)變化在食管癌發(fā)生中起作用，基因差異表達(dá)譜的分析對(duì)于闡明食管癌的遺傳變異及其機(jī)理具有重要作用。15例ESCC表達(dá)譜提示的許多差異基因在ECal09中有類似改變，尤其是MET和PTPN2這兩個(gè)基因在細(xì)胞株和原發(fā)性食管癌組織中有一致的表達(dá)，體現(xiàn)了食管癌有共同的基因變化基礎(chǔ)。食管癌淋巴道轉(zhuǎn)移相關(guān)基因、分化相關(guān)基因及進(jìn)展相關(guān)基因的篩選有助于找到ESCC發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵基因或通路，并可作為ESCC