張應力刺激對大鼠髁突軟骨細胞col-Ⅱ和AGG mRNA表達影響的實驗研究.pdf

1、張應力刺激對大鼠髁突軟骨細胞c01Ⅱ和AGGmRNA表達影響的實驗研究。摘要目的：髁突軟骨是正畸臨床上功能矯形治療的主要“靶點”之一，在矯形力的作用下其能否發(fā)生適應性改建在很大程度上決定著功能矯形治療的成敗，一直被國內(nèi)外學者所關(guān)注。我們的實驗先對SD大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁狀突軟骨細胞進行原代培養(yǎng)，探討周期性張應力對髁突軟骨細胞主要細胞外基質(zhì)II型膠原(夠pe—IIcollagenCol—II)和聚集蛋白聚糖(aggrecanAGG)合成的影響

2、，為治療給予一定理論上的依據(jù)。方法：@SD大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁狀突軟骨細胞體外環(huán)境培養(yǎng)與細胞鑒定：取2周齡的SD大鼠20只斷頸處死后應用機械分離酶消化聯(lián)合法分離雙側(cè)髁突軟骨細胞進行原代體外培養(yǎng)，甲苯胺藍染色證明所培養(yǎng)的細胞合格。②周期性張應力刺激模型建立與ColII、AGGmRNA半定量分析：采用細胞牽張加力儀器對所培養(yǎng)的細胞(第3代)分別加力Oh、1h、6h、12h和24h的周期性張應力，應力拉伸率為10％1HZ。加過力后將不同加力組的細

3、胞非別放置，提取加力細胞的總RNA，反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)測定主要細胞外基質(zhì)C01II和AGG表達變化情況。結(jié)果：①采用機械分離酶化學消化聯(lián)合法獲得數(shù)量足夠的顳下頜關(guān)節(jié)髁狀突軟骨細胞，經(jīng)過細胞特異表型的觀察，確認我們的細胞是想要的大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁狀突軟骨細胞。②半定量PCR顯示：與對照組(Oh組)相比，加力1h時C01II和AGG的表達均增加；加力6h時C01II和AGG表達均顯著增加(pD∞)；細胞加力的時間到12h時C01II和AGG表達

4、均開始下降；當加力至24h時二者表達量均顯著降低(pD∞)。結(jié)論：①采用機械酶化學聯(lián)合法完全可以消化得到大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁狀突軟骨細胞。②C01II、AGG等主要的細胞外的基質(zhì)明顯受到周期性張應力刺激的影響。③適宜時間的張應力刺激可增強C01II、AGG的合成有利于髁突軟骨細胞的增殖及改建；過長時間的張應力刺激使基質(zhì)的合成受到明顯抑制不利于髁突軟骨的改建。研究生：鄭如松導師：楊竹麗教授袁曉副教授關(guān)鍵詞：功能矯形；張應力；髁突軟骨；Ⅱ型膠原

5、；聚集蛋白聚糖目錄弓I言1第一章大鼠髁突軟骨細胞體外培養(yǎng)_力學刺激模型的構(gòu)建11主要材料與試劑：212大鼠髁突軟骨細胞原代培養(yǎng)及鑒定313髁突軟骨細胞力學模型構(gòu)建414實驗結(jié)果5第二章張應力刺激對大鼠髁突軟骨細胞Ⅱ型膠原和聚集蛋白聚糖mRNA表達影響21材料與方法822細胞接種與加載張應力923倒置顯微鏡下加力細胞形態(tài)觀察1024RTPCR檢測C01II和AGGmRNA的表達量1125實驗結(jié)果14討論19參考文獻25綜述一綜述參考文獻攻