幽門螺桿菌毒素相關(guān)蛋白CagA處理胃癌細胞株后比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的:用含幽門螺桿菌NCTC11637(Helicobacter pylori，Hp)毒素相關(guān)基因A(cytotoxin associated gene A，cagA)的真核表達載體pcDNA3.1ZEO(-)/cagA轉(zhuǎn)染胃癌細胞構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染胃癌細胞模型;用幽門螺桿菌NCTC11637直接感染胃癌細胞建立細胞模型，運用蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法，尋找并鑒定差異蛋白，為幽門螺桿菌感染引起胃癌的發(fā)病機制提供一定的理論和實驗依據(jù)。
　　方法

2、:采用本課題組保存的真核表達載體pcDNA3.1ZEO(-)/cagA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染SGC-7901胃癌細胞株;培養(yǎng)幽門螺桿菌NCTC11637感染AGS細胞和SGC-7901胃癌細胞株;分別提取感染與轉(zhuǎn)染細胞總蛋白進行雙向電泳。ImageMaster6.0分析2D膠，尋找三組實驗重疊的差異點。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(Liquid Chromatography tandem mass spectrometry，LC-MS/MS)對差異蛋白進行分析

3、、SEQUEST軟件進行鑒定，經(jīng)NCBI查詢蛋白質(zhì)相關(guān)信息。
　　結(jié)果:對成功構(gòu)建的穩(wěn)定細胞株SGC-7901/cagA，以及Hp感染的高表達CagA胃癌細胞分別行雙向電泳后，得到結(jié)果如下:
　　1.AGS感染實驗:AGS PC（活Hp感染的AGS細胞）與AGS NC（死Hp感染的AGS細胞）組:通過雙向電泳，分別分離的蛋白質(zhì)有1373和1120個，共有39個蛋白質(zhì)斑點在兩組凝膠中有顯著差異表達，其中蛋白表達上調(diào)的有25個，

4、蛋白表達下調(diào)的有14個;
　　2.SGC-7901感染實驗:SGC-7901 PC(活Hp感染的SGC-7901細胞)，SGC-7901NC(死Hp感染的SGC-7901細胞)通過雙向電泳，分別分離的蛋白質(zhì)有1220和1332個，共有51個蛋白質(zhì)斑點在兩組凝膠中有顯著差異表達，其中蛋白表達上調(diào)的有22個，表達下調(diào)的蛋白有29個;3.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染實驗:SGC-7901/cagA PC(含cagA的真核表達載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染SGC-7901組)

5、與SGC-7901/cagA NC（含cagA的真核表達載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染SGC-7901對照組）:通過雙向電泳，分別分離的蛋白質(zhì)有941和977個，共有45個蛋白質(zhì)斑點在兩組凝膠中有顯著差異表達，在SGC-7901/cagA PC中表達量升高的蛋白斑點有26個，在SGC-7901/cagA NC中表達量升高的蛋白斑點有19個。對所選取的15個差異蛋白進行質(zhì)譜分析鑒定，得到乳酸脫氫酶、鈣網(wǎng)織蛋白、二氫硫辛酰胺脫氫酶前體等，這些蛋白質(zhì)功能涉及細

6、胞代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、氧化應(yīng)激等。
　　結(jié)論:1.成功建立Hp感染胃癌細胞株SGC-7901、AGS感染模型;
　　2.成功建立pcDNA3.1ZEO(-)/cagA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染胃癌細胞株SGC-7901模型;
　　3.通過蛋白質(zhì)組學(xué)對Hp及其對照感染胃癌細胞株SGC-7901、AGS，pcDNA3.1ZEO(-)/cagA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染胃癌細胞株SGC-7901及其對照進行研究，總共篩選出15個共同蛋白差異點，鑒定出11個蛋白，這